超全熒光定量PCR應(yīng)用常見問題匯總！2024/11/11

實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)是什么20世界90年代由美國AppliedBiosystems公司推出實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（Real-timeqPCR），其基本原理是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上添加熒光染料或熒光染料探針，利...

PCR擴(kuò)增的抑制劑有哪些？2024/10/2

PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程，其產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加，能將皮克(pg）量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克（μg）水平?？梢詮?00萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的...

干貨：如何增加PCR特異性？2024/9/7

引物設(shè)計(jì)細(xì)心地進(jìn)行引物設(shè)計(jì)是PCR中最重要的一步。理想的引物對只同目的序列兩側(cè)的單一序列而非其他序列退火。設(shè)計(jì)糟糕的引物可能會同擴(kuò)增其他的非目的序列。下面的指導(dǎo)描述了一個可以增加特異性的引物所具有的令...

融解曲線中那些令你頭疼的問題2024/8/24

融解曲線中那些令你頭疼的問題，全面解析看這里！我們在做染料法SYBRGreenqPCR時(shí)，除了要看擴(kuò)增曲線的CT值大小外，另一個重要的指標(biāo)是融解曲線是否為單峰。那您知道融解曲線是怎么來的嗎？為什么說它...

細(xì)胞支原體污染的檢測方法2024/8/17

培養(yǎng)的細(xì)胞可能會污染支原體，支原體是一種常見的細(xì)菌，它可以在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中生長和繁殖。如果實(shí)驗(yàn)操作不當(dāng)，可能會導(dǎo)致支原體污染細(xì)胞培養(yǎng)物。此外，一些細(xì)胞系可能已經(jīng)被感染了支原體，一些培養(yǎng)用的試劑也可能帶有...

衣原體檢測的方法及優(yōu)缺點(diǎn)2024/7/28

衣原體屬于原核生物，嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生，是一種比細(xì)菌小比病毒大的微生物，能通過細(xì)胞濾器，有特殊的兩相發(fā)育周期。它沒有合成高能化合物ATP、GTP的能力，必須由宿主細(xì)胞提供，因而必須依靠寄生才能生存。衣原體...

常見測蛋白濃度方法的優(yōu)缺點(diǎn)比較2024/7/20

蛋白濃度測定的方法有很多，但每種方法都有其特點(diǎn)和局限性，因而需要在了解各種方法的基礎(chǔ)上根據(jù)不同情況選用恰當(dāng)?shù)姆椒ǎ詽M足不同的要求。例如凱氏定氮法結(jié)果精確，但操作復(fù)雜，用于大批量樣品的測試則不太合適；...

測序揭示與干眼癥有關(guān)的眼部微生物組差異2024/4/26

研究人員使用測序技術(shù)來確定健康眼睛患者的微生物組合與干眼癥患者的微生物組合有何不同。這項(xiàng)新研究可能會改善各種眼部問題和影響身體其他部位疾病的治療方法。我們體內(nèi)和體表的微生物群落;統(tǒng)稱為人體微生物群-;...

染料法和探針法熒光定量PCR（RT-qPCR）的優(yōu)缺點(diǎn)比較2023/10/18

一、熒光染料法(SYBRGreen)其原理是：在PCR反應(yīng)體系中加入過量熒光染料，DNA擴(kuò)增的過程中，熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈，發(fā)射熒光信號，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，并且可以實(shí)時(shí)測量。...

Bradford實(shí)驗(yàn)的蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線是線性的嗎？2023/7/7

1976年由Bradford建立的考馬斯亮蘭法（Bradford法）測蛋白濃度，是根據(jù)蛋白質(zhì)與染料相結(jié)合的原理設(shè)計(jì)的。這種蛋白定量方法具有超過其他幾種方法的突出優(yōu)點(diǎn)，操作簡便，反應(yīng)迅速且穩(wěn)定，靈敏度高...

熒光定量 PCR 要點(diǎn)解析2023/6/27

一、熒光定量PCR原理熒光定量PCR（Real-timePCR），是指在PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，通過對擴(kuò)增反應(yīng)中每一個循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實(shí)時(shí)檢測，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法...

細(xì)說Western Blot2023/6/22

與Southern或Northern雜交方法類似，但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載...