閃晶生物地理位置圖,點(diǎn)擊放大!Taq酶特征
• 克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大腸桿菌經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后，再經(jīng)三次過柱純化分離出來的一個(gè)約 94 KD 的重組蛋白。
• 具有 5' 到 3‘合成 DNA 的能力；無3 '到 5‘外切酶的活性。
• 具有 5 ' 到 3 ‘外切酶的活性， 特別適合用于熒光定量PCR 。
• 具有 3‘端加 A 的功能，產(chǎn)物經(jīng)純化后可直接用于T－A克隆。
• 無外源核酸酶和細(xì)菌 DNA 污染。
• SDS － PAGE 檢測，純度＞ 95% 。
• 延伸溫度 72 ℃ ， Mg 2+ 濃度 1.5mM ，dNTPS 濃度 0.2mM , 延伸速度為 2000base/min 。
• 10 × PCR buffer: 500mM KCl, 100mM Tris-HCl (pH 9.0 ， 25℃ ), 1% TritonX-100 和 15mM MgCl2 。
• Storage buffer: 20mM Tris-HCl (pH 8.0), 100mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 50%甘油， 0.5% Nonidet -P40 和 0.5% Tween20 。
Taq酶單位定義
在 74℃ 條件下， 30 分鐘內(nèi)催化 10nmol dNTP 的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量為一個(gè)單位。反應(yīng)條件為： 50mM Tris-HCl (pH 9.0 ， 25℃ ), 50mM NaCl, 5mM MgCl2, 200mM dNTP( 含未標(biāo)記和標(biāo)記 [3H] dTTP ), 10mg 活化的小牛胸腺 DNA 和 0.1mg/ml BSA, 終反應(yīng)體積為 50ml 。
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