提供結(jié)果:
PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物、電泳照片
PCR 條件 | 反應(yīng)體系 | 時(shí)間 |
無(wú)需摸索條件 | 50ul | 1-2 天 |
需要摸索條件 | 50ul | 3-4 天 |
差減雜交PCR |
差減雜交(Subtractive hybridization)的原理非常簡(jiǎn)單,首先將RNA反轉(zhuǎn)錄為雙鏈cDNA,稱(chēng)為tester(含有目的基因);對(duì)照RNA(不含目的基因)同樣處理,產(chǎn)生cDNA為driver,微量的tester和過(guò)量的driver在合適的條件下雜交,tester中和driver中相同的基因雜交子就被除去,在tester中*的基因被富集,通過(guò)PCR方法擴(kuò)增出來(lái),得到差減庫(kù),擴(kuò)增產(chǎn)物可以通過(guò)T載體直接克隆和測(cè)序分析。在探討兩個(gè)相關(guān)組織或兩個(gè)關(guān)聯(lián)過(guò)程中基因表達(dá)差異的情況,通過(guò)該方法可以獲得某些基因在某一樣品中表達(dá),而在對(duì)應(yīng)的樣品中不表達(dá)或表達(dá)量很低。 客戶(hù)需提供兩個(gè)樣品確實(shí)存在顯著差異的證據(jù),并告知打算得到哪個(gè)樣品中被上調(diào)或下調(diào)的基因。如果同時(shí)想知道上調(diào)和下調(diào)的基因,則相當(dāng)于兩個(gè)服務(wù),價(jià)格加倍。 |