熒光定量PCR基本原理
• Taqman 技術(shù):該技術(shù)以美國 ABI 公司為代表。 PCR 擴(kuò)增時,在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針。該探針為一直線型的寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個熒光報告基團(tuán)和一個熒光淬滅基團(tuán),探針完整時,報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收, PCR 儀檢測不到熒光信號; PCR 擴(kuò)增時(在延伸階段), Taq 酶的 5' - 3' 外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴(kuò)增一條 DNA 鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與 PCR 產(chǎn)物形成*同步,這也是定量的基礎(chǔ)所在。
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ABI公司
Taqman探針
MGB探針
Sybr green I染料
ROX染料
Taq酶(熒光定量PCR)
熱啟動酶
熱啟動熒光PCR定量核心試劑盒
一步法RT-PCR試劑盒
TrizolRNA提取試劑
UNG酶
標(biāo)準(zhǔn)品克隆
定點突變
亞克隆
dUTP
• Beacon 技術(shù):該技術(shù)以美國人 Tagyi 為代表。也是加入了熒光探針,但它是 環(huán)狀的寡核苷酸探針,分別由莖部和環(huán)部組成, 兩端分別標(biāo)記 熒光報告基團(tuán)和熒光猝滅基團(tuán),在無靶序列的情況下,探針始終是環(huán)狀,報告基團(tuán)的熒光被猝滅基團(tuán)猝滅,使熒光檢測儀檢測不到熒光信號;而在有靶序列時,即在 PCR 的退火階段探針與靶序列結(jié)合,使熒光報告基團(tuán)和猝滅基團(tuán)分開,這樣熒光儀可以檢測到熒光,熒光信號的強(qiáng)弱代表了靶序列的多少。