TonkBio RT Reagent Kit（for qPCR）

產(chǎn)品名稱：TonkBio RT Reagent Kit（for qPCR）

英文名稱：TonkBio RT Reagent Kit（for qPCR）

產(chǎn)品描述：是專門用于兩步法RT-PCR的*步，含有反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需的全部試劑。具有較強的延伸能力的ToneScript M-MLV能夠在短時間內(nèi)高效的合成用于qPCR的cDNA。操作簡單，適合進行高通量分析?？梢耘浜蟂YBR Green法和Taqman探針法做下一步基因表達分析。

產(chǎn)品特點：

1、可以快速、高效合成qPCR用的cDNA，是兩步法反轉(zhuǎn)錄的優(yōu)選試劑。

2、提供了兩種反轉(zhuǎn)錄引物，OligodT primer和Random primer，可根據(jù)具體反應(yīng)情況使用。反轉(zhuǎn)錄時可以使用OligodT primer或Randomprimer，也可以兩種引物同時使用。

3、反應(yīng)僅需15分鐘。

4、與qPCR試劑兼容性高。

應(yīng)用舉例：

常見問題解析：

1、 沒有RT-PCR產(chǎn)物或產(chǎn)量低

◆RNA模板降解。RNA的純度和完整對于反轉(zhuǎn)錄得到全長cDNA是非常重要的。提取

的RNA應(yīng)進行電泳檢測以確定其是否降解。同時RNA要避免反復凍融。

◆RNA模板純度低。提取RNA的過程中，可能殘留一些鹽離子、試劑，如EDTA、酚、

胍鹽、磷酸鹽、多胺等抑制接下來的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。建議用75%乙醇（DEPC水配制）仔細清洗RNA沉淀。

◆引物不合適。選擇合適的引物，當 RNA是細菌RNA或者是沒有polyA尾的RNA要選擇隨機引物或者特異引物。

◆目的基因含有復雜二級結(jié)構(gòu)或高GC含量。建議選擇隨機引物進行反轉(zhuǎn)錄，將反轉(zhuǎn)錄溫度提高至55℃。

2、RNA 中混有基因組 DNA

◆為避免基因組DNA直接擴增造成結(jié)果不準確，①可以在反轉(zhuǎn)錄之前對RNA進行Dnase I 的消化，②引物設(shè)計時避免基因組擴增，跨較長內(nèi)含子設(shè)計上下游引物。

3、陰性對照中有RT-PCR產(chǎn)物

◆陰性對照中有RT-PCR產(chǎn)物也表明有DNA的污染。在反轉(zhuǎn)錄之前可以對 RNA 進行 DNaseI的消化。