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質(zhì)粒小量提取試劑盒常見問題與解析
閱讀:809 發(fā)布時間:2017-8-1質(zhì)粒小量提取試劑盒常見從1~4mL菌液可以抽提到5~30µg的質(zhì)粒,純度高,OD260/OD280比值一般為1.8-2.0之間,質(zhì)??芍苯佑糜赑CR、酶切、轉(zhuǎn)化測序和體外轉(zhuǎn)錄等后續(xù)實驗。那么在實驗過程中常見問題有哪些,下面跟小編一起來看一下。
質(zhì)粒小量提取試劑盒質(zhì)粒得率低可能原因及解決辦法:
1、菌體未活化,生長效率低,菌量少。需要活化菌種。
2、屬于低拷貝質(zhì)粒,增加菌液的量。
3、SolutionB裂解不充分,室溫靜置5min。
4、zui后洗脫體積不夠,洗脫液不少于50µL。
質(zhì)粒小量提取試劑盒質(zhì)粒純度差可能原因:
1、SolutionA未加入RNaseA或加入RNaseA的SolutionA 未4℃保存。
2、加入SolutionB劇烈震蕩,使得基因組斷裂。
3、加入BufferN操作慢,形成微小沉淀,蛋白質(zhì)無法被充分漂洗干凈。
4、BufferW2未加入無水乙醇。
5、OD260/OD280比值一般在1.8-2.0之間,小于1.8可能有蛋白污染,大于2.0有部分降解或RNA污染。