同科生物FlashPfu 高保真DNA 聚合酶通過融合特殊持進能力增強因子與精心改造過的pfu DNA聚合酶，是來源于超嗜熱古細菌的DNA聚合酶。下面小編為大家介紹一下FlashPfu DNA 聚合酶注意事項：

1、請等2× FlashPfu PCR Buffer (with Mg2+)*溶解后再配制PCR反應(yīng)體系。

2、為了獲得較好的擴增效果，擴增前的所有操作請在冰上進行。在室溫下，聚合酶活力可能會產(chǎn)生非特異性擴增。并且請將FlashPfu DNA Polymerasezui后加入反應(yīng)體系，以避免酶的3’→5’核酸外切酶活力導(dǎo)致引物降解。

3、本產(chǎn)品擴增產(chǎn)物的克隆請按照平頭末端克隆方法操作。

4、引物設(shè)計：

1）引物Tm值計算請使用zui鄰近法（Nearest Neighbor method）。請不要使用其他計算方法，它們計算得到的Tm值偏低，不適合本產(chǎn)品。

2）引物長度控制在20−35堿基，并且Tm > 60°C。

3）引物的GC含量控制在40−60%。

4）在引物3’端以G或C結(jié)尾，可提高引物和模板結(jié)合效率。但是要避免3’端避免有多個G或C，防止非特異性結(jié)合。

5）正、反引物的Tm之差不要大于5°C。

6）正、反向引物的3’端避免相互互補。

7）擴增長片段時，引物長度控制在25−35堿基。

8）進行定點突變時，請將錯配堿基靠近5’端。若錯配堿基靠近3’端，可能會受本酶校正。

不要使用含有尿嘧啶和次黃嘌呤核苷的引物。