ToneScript One Step SYBR qRT-PCR kit

ToneScript One Step SYBR qRT-PCR kit是采用SYBR Green I嵌合熒光法進(jìn)行One Step qRT-PCR的試劑。使用本試劑盒進(jìn)行qRT-PCR反應(yīng)可在同一反應(yīng)管內(nèi)連續(xù)進(jìn)行，操作簡單，并能有效防止污染。本反應(yīng)體系由于可以對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)，大大提高了檢測(cè)的靈敏度，并省略了PCR反應(yīng)后電泳的步驟，非常適合微量RNA的檢測(cè)。

一步法熒光定量耐熱反轉(zhuǎn)錄PCR試劑盒

產(chǎn)品名稱：ToneScript One Step SYBR qRT-PCR kit

英文名稱：ToneScript One Step SYBR qRT-PCR kit

產(chǎn)品編號(hào)：TK08045

產(chǎn)品包裝規(guī)格：50 µl反應(yīng)× 100次

儲(chǔ)存條件及有效期：試劑盒于-20℃避光保存，有效期12個(gè)月。

ToneScript One Step SYBR qRT-PCR kit 產(chǎn)品描述：

本試劑盒是采用SYBR Green I嵌合熒光法進(jìn)行One Step qRT-PCR的試劑。使用本試劑盒進(jìn)行qRT-PCR反應(yīng)可在同一反應(yīng)管內(nèi)連續(xù)進(jìn)行，操作簡單，并能有效防止污染。本反應(yīng)體系由于可以對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)，大大提高了檢測(cè)的靈敏度，并省略了PCR反應(yīng)后電泳的步驟，非常適合微量RNA的檢測(cè)。

ToneScript One Step SYBR qRT-PCR kit 產(chǎn)品特點(diǎn)：

本產(chǎn)品中使用了于qRT-PCR的反轉(zhuǎn)錄酶ToneScript RTase和抗體修飾的具有高效擴(kuò)增效率的Hot Start Taq Polymerase，能進(jìn)行穩(wěn)定的One Step qRT-PCR反應(yīng)，可以快速、準(zhǔn)確地對(duì)RNA病毒等微量RNA進(jìn)行分析。本品可以在寬廣的定量區(qū)域內(nèi)得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)靶基因進(jìn)行準(zhǔn)確定量檢測(cè)，重復(fù)性好，可信度高。

準(zhǔn)備材料：

實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀、RNA模板、PCR引物、移液器槍頭。

注意事項(xiàng)：

1、根據(jù)不同的熒光定量PCR系統(tǒng)來決定ROX Reference Dye的使用。

2、當(dāng)有多個(gè)樣品進(jìn)行反應(yīng)時(shí)，應(yīng)先配制各種試劑的混合液，然后再分裝到每個(gè)反應(yīng)管中，可使所取試劑體積準(zhǔn)確，避免同一試劑多次吸取造成浪費(fèi)，同時(shí)也減少每個(gè)樣品之間的誤差。

3、使用ToneScript One Step Enzyme Mix時(shí)應(yīng)輕輕混勻，避免起泡，吸取應(yīng)請(qǐng)短暫離心，將試劑收集到管底部，同時(shí)由于含有甘油，所以應(yīng)緩慢吸取，并且槍頭不宜插入液面過深，造成損失。

4、2×One Step SYBR qRT-PCR buffer溶解后要充分混合，使用Vortex等振蕩*溶解后使用。

5、本制品中使用的 Hot Start Taq Polymerase是用Taq抗體修飾的 Hot Start 高效DNA聚合酶，與化學(xué)修飾型的 Hot Start DNA聚合酶相比，不需要PCR反應(yīng)前的95℃，5-10 min的預(yù)變性，高溫處理時(shí)間過長，會(huì)使酶的活性下降，其PCR擴(kuò)增效率和定量準(zhǔn)確度都會(huì)受到影響。

6、本產(chǎn)品只能用基因特異反轉(zhuǎn)錄引物，不能使用Random Primer和Oligo dT Primer等進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。

RNA模板制備注意事項(xiàng)

RNA模板可以采用總RNA或mRNA。本試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，然后對(duì)cDNA進(jìn)行擴(kuò)增，RNA的純度會(huì)影響cDNA的合成量，制備RNA的關(guān)鍵是要抑制細(xì)胞中和環(huán)境中的RNase，防止RNA降解。因此，在實(shí)驗(yàn)中戴一次性手套，使用RNA實(shí)驗(yàn)臺(tái)，實(shí)驗(yàn)中避免講話等。相關(guān)實(shí)驗(yàn)耗材應(yīng)用0.1%DEPC（焦碳酸二乙酯）水溶液在37℃處理12 h，并高壓滅菌30 min后使用。