質(zhì)量光度儀

2018年，牛津大學(xué)的Philipp Kukura團(tuán)隊(duì)宣布一種全新技術(shù)：在干涉反射顯微鏡和干涉散射顯微鏡的原理之上，通過單分子散射光的方式準(zhǔn)確測(cè)量溶液中單個(gè)分子的質(zhì)量，為生物分析和研究生物分子的功能開辟了新的方法：質(zhì)量光度法

質(zhì)量光度法是一種革命性的分析生物分子的新方法，即超微量單分子質(zhì)量和分布測(cè)量分析法是一種革命性的分析生物分子的新方法。它能夠在溶液中準(zhǔn)確測(cè)量單個(gè)分子的質(zhì)量，不需要任何偶聯(lián)固化或者標(biāo)記標(biāo)簽，在天然狀態(tài)下，完成對(duì)生物分子的分析。這種方法為生物分析和生物分子功能研究開辟了新的可能性 ，可以以很高的靈敏度、速度、準(zhǔn)確度和簡(jiǎn)單性來表征感興趣的分子，是監(jiān)測(cè)蛋白質(zhì)純化、優(yōu)化樣品、研究蛋白質(zhì)功能和相互作用的理想儀器。所有測(cè)量都可在各種各樣的天然緩沖液中逐個(gè)分子地完成，無需標(biāo)記裝飾，就可以直觀地解釋質(zhì)量分布結(jié)果。 

質(zhì)量光度儀分析儀器的特點(diǎn)：

· 準(zhǔn)確表征樣品的天然屬性；

• 保持結(jié)構(gòu)完整性和活性； 

測(cè)量只需要幾微升的樣品；

• 設(shè)計(jì)緊湊的臺(tái)式儀器，無特殊安裝要求；

• 軟件自動(dòng)控制采集過程，并在幾分鐘內(nèi)進(jìn)行質(zhì)量分析；

• 直觀地解釋質(zhì)量分布的結(jié)果，而不需要任何經(jīng)驗(yàn)和知識(shí)；

• 準(zhǔn)確測(cè)量在溶液（而不需真空）中的蛋白分子質(zhì)量；

• 單分子分析，可靠區(qū)分樣品中所有已知和未知組分，高精度捕獲高豐度和低豐度分子；

• 快速、簡(jiǎn)單、最小樣本量：納米濃度下的微升樣品體積，幾分鐘內(nèi)獲得結(jié)果，寬質(zhì)量范圍和高動(dòng)態(tài)范圍；

質(zhì)量光度儀分析儀器應(yīng)用領(lǐng)域  ：

樣品純度和成分分析 Sample characterization  

異質(zhì)生物分子的質(zhì)量分析測(cè)量 Protein oligomerization

生物分子間相互作用 Biomolecular interactions

蛋白質(zhì)復(fù)合物的組裝與化學(xué)計(jì)量 Macromolecular assemblies

質(zhì)量光度法的技術(shù)路線：

質(zhì)量光度法（一）-iSCAT法觀察單個(gè)分子

質(zhì)量光度法（二）-SNR分析處理

質(zhì)量光度法（三）-分子計(jì)數(shù)

質(zhì)量光度法（四）-對(duì)比分子量轉(zhuǎn)換

質(zhì)量光度儀TwoMP分析儀器的特點(diǎn)：

緊湊的臺(tái)式儀器，安裝要求低——測(cè)量只需要幾微升的樣品、和干凈、高質(zhì)量的蓋玻片，幾分鐘內(nèi)可獲得結(jié)果；

直觀高效——Refeyn的軟件自動(dòng)控制采集過程，并在幾分鐘內(nèi)完成質(zhì)量分析。您可以直觀地解釋質(zhì)量分布結(jié)果，而無需任何先驗(yàn)知識(shí)；

的精確性——由于其高靈敏度，非常適合在生理（低）濃度下進(jìn)行測(cè)量，而單分子計(jì)數(shù)技術(shù)固有的高動(dòng)態(tài)范圍確保低豐度分子仍能被準(zhǔn)確捕獲。質(zhì)量光度法能輕松量化不同種類的蛋白質(zhì)分子，具有高分辨率和重復(fù)性；

性能參數(shù)

原理：干涉光散射，無需標(biāo)記

質(zhì)量范圍：30kDa – 5MDa

測(cè)量精度：±2% @ 10 nm

單次測(cè)量質(zhì)量誤差：±5% @ 10 nm

分辨率（FWHM）：25kDa @ 66kDa，60KDa @ 660 kDa

濃度范圍：100pM - 100nM（粒子濃度）

靈敏度：< 1ng蛋白質(zhì)

樣品體積：5 - 20 μ l

幀率（標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置）：1 kHz（原始），100 Hz（集成）

視場(chǎng)：4 x 11µm （@ 500 Hz）至12 x 17µm（@ 135 Hz）

波長：488 nm

像素尺寸：12nm