潔凈室檢測-潔凈度沉降菌測試 采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物性粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈室(區(qū))的潔凈度，本方法采用。GB/T 16294-2010《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))沉降菌的測試方法》進行。
潔凈室檢測-潔凈度沉降菌測試 測試狀態(tài)
1、沉降菌測試前被測試潔凈室已經(jīng)過消毒。
2、測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報告中（原始記錄）中注明測試狀態(tài)。
3 測試人員
3.1 測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服。
3.2 靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于2人。
4 培養(yǎng)基
4.1 培養(yǎng)基用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基或沙氏培養(yǎng)基。
4.2 培養(yǎng)皿一般采用 Ф90mm×15mm規(guī)格的培養(yǎng)皿。測試前培養(yǎng)皿表面必須嚴格消毒。
4.3 將培養(yǎng)基按要求配制加熱熔化后，分裝、滅菌。冷卻至60℃時，在無菌操作要求下傾注約20ml至無菌平皿中。加蓋后在室溫放至凝固。
4.4 制備好的培養(yǎng)基平皿在 2～8 ℃保存，一般以一周為宜。
5 測試時間
測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于30min以后開始。
6 測試點和記錄
6.1 測試點按附錄《沉降菌測試點分布圖》。
6.2 測試點（采樣點）的位置離地面 0.8米左右（略高于工作面）。
6.3 在測試報告中應(yīng)記錄房間溫度、相對濕度、測試狀態(tài)。
6.4 用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。
6.5不同面積的最少采樣點數(shù)目見表1
面積㎡ | 潔凈度級別 | |||
100 | 10000 | 100000 | 300000 | |
＜10 | 2~3 | 2 | 2 | 2 |
≥10~＜20 | 4 | 2 | 2 | 2 |
≥20~＜40 | 8 | 2 | 2 | 2 |
≥40~＜100 | 16 | 4 | 2 | 2 |
≥100~＜200 | 40 | 10 | 3 | 3 |
≥200~＜400 | 80 | 20 | 6 | 6 |
≥400~＜1000 | 160 | 40 | 13 | 13 |
≥100~＜2000 | 400 | 100 | 32 | 32 |
≥2000 | 800 | 200 | 63 | 63 |
注：對于100級的單向流潔凈室（區(qū)），包括100級潔凈工作臺，面積指的是送風口表面積；對于10000級以上的非單向流潔凈室（區(qū)），面積指的是房間面積 | ||||
最少培養(yǎng)皿數(shù)：在滿足最少采樣點數(shù)目的同時，還應(yīng)滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)，見表2
表2
潔凈度級別 | 最少培養(yǎng)皿數(shù)（φ90mm） |
100 | 14 |
10000 | 2 |
100000 | 2 |
4.6.7采樣次數(shù)：每個采樣點一般采樣一次
7 平均菌落數(shù)的計算：
M=(M1+M2+M3)/N
平均菌落數(shù) … (1)
式中： M代表平均菌落數(shù)
Mn代表n號培養(yǎng)皿的菌落數(shù)
N代表培養(yǎng)皿總數(shù)
8 測試步驟8.1 將已制備好的培養(yǎng)皿按采樣點布置圖逐個放置，然后從里到外逐個打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露在空氣中。靜態(tài)測試時，培養(yǎng)皿暴露時間為30min以上，動態(tài)測試時培養(yǎng)皿暴露時間為30min。
8.2 采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
8.3 培養(yǎng)不同類型培養(yǎng)基的培養(yǎng)溫度及時間見下表：
培養(yǎng)基類型 | 培養(yǎng)箱溫度 | 時間 |
TSA | 30℃~35℃ | 不少于2d |
SDA | 20℃~25℃ | 不少于5d |
8.4 每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染，可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。
8.5 用肉眼對培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計數(shù)，標記或在菌落計數(shù)器上點計，然后用5-10倍放大鏡檢查，有否遺漏。若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。
9 測試要點
9.1 測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。
9.2 采取一切措施防止人為對樣本的污染。
9.3 由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用投射光于平皿背面或正面仔細觀察不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。
9.4 采樣前應(yīng)仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。
9.5對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細的記錄。
10、記錄測試報告應(yīng)包括以下內(nèi)容：
1、測試者的名稱和地址，測試日期。
2、測試依據(jù)。
3、被測潔凈室的平面位置
4、有關(guān)測試儀器及其測試方法的描述：包括測試環(huán)境條件，采樣點數(shù)目及布置圖，測試次數(shù)，或可能存在的測試方法的變更，測試儀器的檢定證書等，若為動態(tài)測試，則還應(yīng)記錄現(xiàn)場操作人員數(shù)量及位置，現(xiàn)場設(shè)備運轉(zhuǎn)數(shù)量及位置。
5、測試結(jié)果：包括所有統(tǒng)計計算資料。
11、結(jié)果評定：
1、每個測點的沉降菌平均菌落數(shù)必須低于所選定評定標準中的界限。
2、在靜態(tài)測試時，若某測點的沉降菌平均菌落數(shù)超過評定標準，則應(yīng)重新采樣兩次，兩次測試結(jié)果均合格才能判為符合。
GB 50687-2011 食品工業(yè)潔凈用房建筑技術(shù)規(guī)范 | |||||||
潔凈用房等級 | 空氣浮游菌 cfu/m3 | 空氣沉降菌（φ90mm） | 表面微生物（動態(tài)） | ||||
接觸皿（φ55mm） cfu/皿 | 5 指手套 cfu/手套 | ||||||
靜態(tài) | 動態(tài) | 靜態(tài)cfu/30 分鐘 | 動態(tài)cfu/4 小時 | 與食品接觸表面 | 建筑內(nèi) 表面 | ||
I 級 | 5 | 10 | 0.2 | 3.2 | 2 | 不得有 霉菌斑 | ＜2 |
Ⅱ級 | 50 | 100 | 1.5 | 24 | 10 | 5 | |
Ⅲ級 | 150 | 300 | 4 | 64 | 不作規(guī)定 | 不作規(guī)定 | |
Ⅳ級 | 500 | 不作規(guī)定 | 不作規(guī)定 | 不作規(guī)定 | 不作規(guī)定 | 不作規(guī)定 | |
《化妝品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》2022版 懸浮粒子 沉降菌 浮游菌測試參數(shù)要求 | ||||
區(qū)域劃分 | 產(chǎn)品類別 | 生產(chǎn)工序 | 控制指標 | |
環(huán)境參數(shù) | ||||
潔凈區(qū) | 眼部護膚類化妝品④、兒童護膚類化妝品④、牙膏 | 半成品貯存①、填充、灌裝，清潔容器與器具貯存 | 懸浮粒子②：≥0.5μm的粒子數(shù)≤10500000個/m3 ≥5μm的粒子數(shù)≤60000個/m3 浮游菌②：≤500cfu/m3 沉降菌②：≤15 cfu/30min | |
潔凈廠房設(shè)計規(guī)范GB 50457-2019 藥品生產(chǎn)管理規(guī)范2010修訂版 | ||||
潔凈度級別 | 浮游菌 | 沉降菌（f90mm） | 表面微生物 | |
cfu/m3 | cfu /4小時(2) | 接觸（f55mm）cfu /碟 | 5指手套 cfu /手套 | |
Aji | <1 | <1 | <1 | <1 |
B級 | 10 | 5 | 5 | 5 |
C級 | 100 | 50 | 25 | － |
D級 | 200 | 100 | 50 | － |
YY 0033-2000無菌醫(yī)療器具生產(chǎn)管理規(guī)范 無菌醫(yī)療器具潔凈室（區(qū)）環(huán)境要求及監(jiān)測附錄3 | ||||
技術(shù)指標 | ||||
監(jiān)測項目 | 100級 | 10 000級 | 100000級 | 300000級 |
沉降菌數(shù)，個／皿 0.5h | ≤l | ≤3 | ≤10 | ≤l5 |
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