熒光原位雜交技術(shù)(Fluorescenceinsituhybridization,FISH):根據(jù)已知微生物不同分類級別上種群特異的DNA序列,以利用熒光標(biāo)記的特異寡聚核苷酸片段作為探針,與環(huán)境基因組中DNA分子雜交,檢測該特異微生物種群的存在與豐度。
FISH技術(shù)作為非放射性檢測體系,具有以下優(yōu)點(diǎn)
1、熒光試劑和探針經(jīng)濟(jì)、安全;
2、探針穩(wěn)定,一次標(biāo)記后可在兩年內(nèi)使用;
3、實(shí)驗(yàn)周期短、能迅速得到結(jié)果、特異性好、定位準(zhǔn)確;
4、FISH可定位長度在1kb的DNA序列,其靈敏度與放射性探針相當(dāng);
5、多色FISH通過在同一個(gè)核中顯示不同的顏色可同時(shí)檢測多種序列;
6、既可以在玻片上顯示中期染色體數(shù)量或結(jié)構(gòu)的變化,也可以在懸液中顯示間期染色體DNA的結(jié)構(gòu)。
缺點(diǎn):不能達(dá)到99%雜交,特別是在應(yīng)用較短的cDNA探針時(shí)效率明顯下降。