利用斑馬魚模型評(píng)價(jià)抗焦慮功效【評(píng)價(jià)原理】
斑馬魚擁有與人類相似的神經(jīng)組織器官，下丘腦、丘腦、基底神經(jīng)節(jié)、邊緣系統(tǒng)等都是與焦慮相關(guān)的腦區(qū)。鹽酸鹽(mCPP)是一種非特異性5 -羥色胺（5-HT）能激動(dòng)劑，5-HT廣泛存在于上述腦區(qū)。研究表明mCPP可通過影響5-HT通路而誘導(dǎo)焦慮。氨基丁酸（GABA）是哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛分布的一種抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，腦中GABA水平的下降會(huì)產(chǎn)生抑郁、緊張、焦慮、失眠等情緒問題。谷氨酸脫羧酶(GAD)是谷氨酸向GABA轉(zhuǎn)化的限速酶。單胺氧化酶（MAO）是一種具有多個(gè)結(jié)合部位的單一分子酶，對(duì)底物的特異性不高，可使多種胺類氧化脫氨，從而影響多種神經(jīng)遞質(zhì)的代謝，斑馬魚體內(nèi)只有一種Mao序列，具有人MAO-A和人MAO-B的性質(zhì)，且與人MAO-A更相似。在大多數(shù)物種中，MAO-A降解5-HT。研究表明斑馬魚的運(yùn)動(dòng)活動(dòng)和趨向性是反映焦慮的兩個(gè)重要指標(biāo)。GAD2基因與焦慮和情感障礙關(guān)系密切。5-HT通過5-羥色胺受體2A（htr2aa）增加焦慮樣行為。GABA-A受體在焦慮發(fā)生中起重要作用。研究表明MAO-A/B雙敲除小鼠的5-HT分解降低，焦慮增加。
因此，我們可以通過檢測斑馬魚的行為來判斷斑馬魚是否產(chǎn)生焦慮。同時(shí)還可以通過檢測焦慮相關(guān)基因（如gabra1、gad2、htr2aa基因）相對(duì)表達(dá)量以及MAO含量來評(píng)價(jià)斑馬魚是否產(chǎn)生焦慮。
利用斑馬魚模型評(píng)價(jià)抗焦慮功效【實(shí)驗(yàn)方案】
我們將受測試斑馬魚分成三組，分別是正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和服用焦慮改善劑組。其中正常對(duì)照組未經(jīng)任何處理，模型對(duì)照組與服用焦慮改善劑組都攝入了等量的mCPP（mCPP通過溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內(nèi)）。服用焦慮改善劑組在攝入mCPP的同時(shí)攝入司來吉蘭之類的焦慮改善劑。
服用一段時(shí)間焦慮改善劑后，我們（1）分析斑馬魚的總運(yùn)動(dòng)距離；（2）用q-PCR檢測焦慮相關(guān)基因表達(dá)；（3）用試劑盒檢測單胺氧化酶（MAO）活性。
【結(jié)果展示】
（1）行為學(xué)：
圖1. 斑馬魚總運(yùn)動(dòng)距離
與模型對(duì)照組比較，***p < 0.001
可以看到，服用焦慮改善劑組的運(yùn)動(dòng)距離與正常對(duì)照組比較相似，運(yùn)動(dòng)距離沒有明顯的增加。
（2）gabra1、gad2、htr2aa基因相對(duì)表達(dá)量：
圖2. 斑馬魚gabra1基因相對(duì)表達(dá)量
與模型對(duì)照組比較，*p < 0.05
可以看到，服用焦慮改善劑組斑馬魚gabra1基因相對(duì)表達(dá)量與正常對(duì)照組比較相似，較模型對(duì)照組明顯增加。
圖3. 斑馬魚gad2基因相對(duì)表達(dá)量
與模型對(duì)照組比較，*p < 0.05
可以看到，服用焦慮改善劑組斑馬魚gad2基因相對(duì)表達(dá)量與正常對(duì)照組比較相似，較模型對(duì)照組明顯增加。
圖4. 斑馬魚htr2aa基因相對(duì)表達(dá)量
與模型對(duì)照組比較，**p < 0.05
可以看到，服用焦慮改善劑組斑馬魚htr2aa基因相對(duì)表達(dá)量與正常對(duì)照組比較相似，較模型對(duì)照組明顯降低。
（3）單胺氧化酶（MAO）活性：
圖5. 斑馬魚單胺氧化酶活性量
與模型對(duì)照組比較，*p < 0.05
可以看到，服用焦慮改善劑組斑馬魚單胺氧化酶活性與正常對(duì)照組比較相似，較模型對(duì)照組明顯降低。
【評(píng)價(jià)結(jié)論】
1.經(jīng)過每組30尾斑馬魚的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，服用焦慮改善劑組斑馬魚總運(yùn)動(dòng)距離、gabra1、gad2和htr2aa基因相對(duì)表達(dá)量及MAO活性與正常對(duì)照組相似。
2.本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了司來吉蘭有明顯抗焦慮功效。
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