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純化小技巧 | 抗體分離中的陽離子交換層析介質(zhì)

來源:百林科醫(yī)藥科技(上海)有限公司   2024年05月23日 10:07  
 

 

在抗體純化的經(jīng)典三步法
 
親和捕獲+陽離子交換+陰離子交換
 
早期已介紹過百林科陰離子交換層析介質(zhì)
 
詳見
 

 

 
  今天,重點介紹一下百林科陽離子交換層析介質(zhì)
 
  百林科陽離子交換層析介質(zhì)豐富多樣,依據(jù)基架類型,分為MaXtar® 基架和Chromstar® 基架,兩者主要區(qū)別在于耐壓,MaXtar® 基架通??梢阅褪?.5MPa壓力,Chromstar®基架可以耐受0.3MPa壓力;根據(jù)配基的類型,可以分為SP(強陽)、S(強陽)、CM(弱陽)幾種類型。

百林科MaXtar® 基架的 

幾種陽離子交換層析介質(zhì)介紹
 
  * 動態(tài)載量的測量條件:4.7 ml 預(yù)裝柱,裝柱高度:10 cm,在保留時間為5分鐘時測量10% 穿透時的動態(tài)結(jié)合能力。測試緩沖液:50 mM 醋酸鈉,pH 5.5(單克隆抗體)。
 
  ** 動態(tài)載量測量條件:裝柱高度:10 cm,測試流速600 cm/h ,測試緩沖液:0.1 M 檸檬酸鹽溶液,pH 3.0,測試樣品:4 mg/ml 的 β- 乳球蛋白樣品,當 β-乳球蛋白的穿透量達到10% 時,單位介質(zhì)體積(ml) 的 β- 乳球蛋白上樣量(mg)。
 
  *** 動態(tài)載量測量條件:裝柱高度:10 cm,測試流速150 cm/h ,測試緩沖液:0.2 M 磷酸鈉溶液,pH 7.2,測試樣品:4 mg/ml 溶菌酶樣品,當溶菌酶的穿透量達到10% 時,單位介質(zhì)體積(ml) 的溶菌酶上樣量(mg)。
 
  MaXtar® S HC作為百林科的明星產(chǎn)品,是一款高載量高分辨率的強陽離子交換層析介質(zhì),利用不同分子在特定條件下電荷性質(zhì)和多少的差異對其進行分離。
 
  在抗體的應(yīng)用上有突出的高載量  
 
  采用CHO細胞表達的單克隆抗體(精純后蛋白)作為樣品,對MaXtar® S HC和MaXtar® SP HR的DBC(動態(tài)結(jié)合載量)進行探索,發(fā)現(xiàn):MaXtar® S HC的DBC明顯優(yōu)于MaXtar® SP HR,是其的2倍。實驗條件如下:
 
  層析柱:4.7 ml預(yù)裝柱,裝柱高度10 cm,柱體積約4.7 ml
 
  樣品:CHO細胞表達的單克隆抗體(精純后蛋白)
 
  平衡緩沖液:50mM醋酸鈉,pH5.5
 
  洗脫緩沖液:50mM醋酸鈉,1M氯化鈉,pH5.5
 
  保留時間:5 min

圖1. MaXtar® S HC和MaXtar® SP HR 10%
穿透(QB10)曲線

表1. MaXtar® S HC和MaXtar® SP HR
在QB10的動態(tài)結(jié)合力

 
  在抗體的應(yīng)用上有突出的高回收率  
 
  依據(jù)單抗料液實際載量的80%進行上樣洗脫測試,發(fā)現(xiàn):MaXtar® S HC純化后樣品純度達99.4%,收率為92.6%,HCP去除效果很好。實驗條件如下:
 
  層析柱:4.7 ml預(yù)裝柱,裝柱高度10 cm,柱體積約4.7 ml
 
  樣品:陰離子交換層析介質(zhì)純化后的單抗料液
 
  平衡緩沖液:50mM醋酸鈉,pH5.12
 
  洗脫緩沖液:50mM醋酸鈉,1M氯化鈉,pH5.11,0~100%B 20CV
 
  保留時間:5 min

圖2. MaXtar® S HC的結(jié)合洗脫圖譜

表2. MaXtar® S HC的純化結(jié)果

 
  MaXtar® S HC除去在抗體純化上有優(yōu)異得表現(xiàn)外,同樣也適用于抗體偶聯(lián)藥物(Antibody-Drug Conjugate,ADC)的精純,詳見【純化小技巧 | 百林科助力ADC下游純化的層析介質(zhì)】。
 
  百林科也希望在抗體、ADC及更多領(lǐng)域為客戶提供完善的服務(wù)支持,助力各領(lǐng)域“通達無限可能”。
 
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