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細(xì)胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術(shù),要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室和設(shè)計(jì)原則是防止微生物污染和有害因素影響,要求工作環(huán)境清潔、空氣清新、干燥和無煙塵。
干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室應(yīng)至少能夠執(zhí)行六項(xiàng)任務(wù):無菌處理、孵化、制備、清洗、滅菌、存儲。
一.無菌操作區(qū)
(1)無菌操作區(qū)域:無菌操作區(qū)域在干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室中負(fù)責(zé)細(xì)胞培養(yǎng)和其他無菌操作區(qū)域,與外界隔離,不能穿行或受其他干擾。
理想的無菌操作室應(yīng)分為三個部分:
a)更衣室——更換衣服、鞋子,穿戴帽子和面具。
b)緩沖室 -——位于更衣室和手術(shù)室之間,以確保手術(shù)室內(nèi)的無菌環(huán)境,并放置恒溫培養(yǎng)箱和一些必要的小器械。
c)無菌手術(shù)室——于無菌處理、細(xì)胞培養(yǎng)。房間大小應(yīng)適當(dāng),頂部不宜過高(不超過2.5m),以確保紫外線的有效殺菌 效果;墻壁光滑,方便清潔和消毒。工作臺不應(yīng)靠墻放置。臺面要平滑壓塑作表面,涂漆成白色或灰色,以便于觀 察解剖結(jié)構(gòu)和酚紅。
(2)凈化工作臺:操作簡單,安裝方便,占用空間小,凈化效果好。在一實(shí)驗(yàn)室中主要使用的兩種的凈化工作臺:
a)側(cè)流或垂直式
b)外流或水平層流式。
二.孵化區(qū)
盡管該區(qū)域?qū)o菌的要求并不比無菌區(qū)域嚴(yán)格,但它們?nèi)匀恍枰鍧崯o塵,因此它們也應(yīng)放置在干擾少的區(qū)域。孵育可以在培養(yǎng)箱中或控制溫度的溫室中進(jìn)行,相比之下溫室是費(fèi)用較高,通常實(shí)驗(yàn)室多采用培養(yǎng)箱孵育。
三.制備區(qū)
在該區(qū)域中,主要進(jìn)行培養(yǎng)液,有關(guān)培養(yǎng)用液等實(shí)驗(yàn)用品的制備。
四.存儲區(qū)域
主要存放各種冰箱、干燥箱、液氮罐、無菌培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶等,此環(huán)境還需要清潔無塵。
五.清潔和消毒區(qū)域
清潔和消毒區(qū)域應(yīng)與其他區(qū)域分開,主要用于清潔所有細(xì)胞培養(yǎng)容器、準(zhǔn)備、消毒及三蒸水制造等。