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ELISA實驗前的注意事項
為了幫助您更好地解決在實驗中可能碰到的各種問題,我們設(shè)計了這些問題指導(dǎo),配以試劑
盒內(nèi)的說明書一起供您參考使用。如果您在實驗中遇到任何暫時無法解決的特殊問題,敬請咨詢
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ELISA實驗前的注意事項
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氯霉素檢測試劑盒_美國REAGEN原裝試劑盒樣品的準(zhǔn)備
首先樣品要保存適當(dāng)。在2-4°C下樣品只能放置1-2天,一般長時間保存就要在-20°C下冷藏,使用前使樣品恢復(fù)到室溫。
干肉類/魚
1.樣品磨碎混勻;
2.取5g勻質(zhì)樣品放入一干凈的器皿中;
3.加入25ml 70%甲醇振蕩20分鐘;
4.室溫(22.5±2.5)°C 4000rpm離心10分鐘;
5.取1ml上清液用1ml去離子水稀釋;
6.每孔加50L稀釋后的上清液。
稀釋倍數(shù):10
谷類/飼料/種子
1.研磨粉碎具有代表性的樣品(根據(jù)現(xiàn)有的取樣技術(shù))。
2.秤取5g粉碎均勻的樣品,并將它們放入一個合適的試管中。
3.加25ml 35%的甲醇,震蕩搖勻5min。
4.離心10min,4000r/min。
5.取20L上清液,加入780L 35%的甲醇,混勻。
6.取50ul加入到酶標(biāo)板的微孔中進(jìn)行ELISA分析測試。
*注:稀釋系數(shù):200。如果需要增加樣本容量,因此必須改變甲醇/水的體積,舉例子,如果一個10g的樣品來用,50ml35%甲醇可以使用;如用戶根據(jù)需要和條件稱樣可加倍或者減半,后面提取用到的試劑相應(yīng)的加倍或者減半,稀釋倍數(shù)不變。特殊樣品及高背景值樣品稀釋倍數(shù)可調(diào)500倍。
以下為計算份量的表格,用戶可根據(jù)自己的需要來確定需要配置多少試劑。
溶液 | 用量 | 24個反應(yīng) |
一抗 | 50mL | 1.2ml |
二抗工作液 | 50mL | 1.2ml |
工作洗液 | 1.0ml | 24ml |
終止液 | 100mL | 2.4ml |
TMB底物 | 100mL | 2.4ml |
- 分別加入50mL標(biāo)準(zhǔn)品或50mL樣品到所設(shè)定的孔中;
- 每孔加入50mL 1×二抗后加入50mL一抗,輕輕搖勻1分鐘;
- 室溫(22.5±2.5)°C避光下孵育30分鐘;
- 先倒掉微孔的液體,再加入1×洗液250mL洗板3次,zui后一次洗板后將酶標(biāo)板倒置在潔凈紙巾上拍干,除去剩余水分;
- 各孔加入100mL TMB底物,輕輕震蕩1分鐘,室溫(22.5±2.5)°C避光孵育10分鐘;
- 加入100mL終止液;
- 酶標(biāo)儀450nm讀板。
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