犬惡絲蟲PCR檢測(cè)試劑盒說明書 返回列表頁(yè)

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

特點(diǎn)：
高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴(kuò)增；
高靈敏度：檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100；
操作簡(jiǎn)便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè)；
高通量：多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。

樣品 DNA 的制備：
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購(gòu)本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級(jí)版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）。
稀釋陽性對(duì)照（以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供可以直接使用的長(zhǎng)為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對(duì)照。
2.標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4.在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。5.換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
6.換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7.換槍頭，在 4 號(hào)管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 4 號(hào)管中，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。
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使用及效果：
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

ELISAKitforHumanGamma-interferon-inducibleprotein1634620-77-4 20mg MALTOHEXAOSE 0.156-10 ng/mL麥芽六糖

含青霉素酶TSA培養(yǎng)基平板（7cm）無氰溶血?jiǎng)?10個(gè)/包供應(yīng)無氰溶血?jiǎng)┤毡維ysmex試劑KX-21試劑

無菌豬血清/SterileDefidrinatedPigBlood166-17945BR導(dǎo)電率測(cè)量方法總則中的鉀標(biāo)準(zhǔn)液的制備

ELISAKitforHumanTumornecrosisfactor10mg 15.6-1000 pg/mL蘆薈甙 A ALOIN A(BARBALOIN)(P)

人正常前列腺基質(zhì)永生化細(xì)胞，WPMY-1細(xì)胞 20mg HPLC≥98%corylin用于含量測(cè)定1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶補(bǔ)骨脂寧；補(bǔ)骨脂異黃

人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞，Ishikawa細(xì)胞 20mg HPLC≥98%Bulleyaconitine A用于含量測(cè)定1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶草烏素

B4GALT1/GGTB2抗體,鼠單抗475-83-2HPLC≥98%A041820mg/支ELISA   荷葉堿

ELISAKitforHumanDiscoidindomain-containingreceptor257817-89-7 20mg Stevioside 0.312-20 ng/mL甜菊糖

CEACAM3/CD66d抗體,兔多抗33171-16-3C19H16O4Demethoxycurcumin≥98%ELISA   去氧基姜黃素

含青霉素酶TSA培養(yǎng)基平板500g 7cm/個(gè)*10Urea 尿素

ELISAKitforHumanCytosolicphospholipaseA2100MG 3.12-200 U/mLN-苯酰-DL-苯丙氨酸-2-萘酯[用于胰凝蛋白酶的測(cè)定] N-Benzoyl-DL-phenylalanine 2-Naphthyl Ester [for Determination of Chymotrypsin]>98.0%(LC)

布氏肉湯/BrucellaBroth1690-75-1用于彎曲桿菌增菌肉湯和布氏瓊脂的制備1-基-4-哌啶酸酯

人神經(jīng)秩蛋白（Neurturin）ELISA試劑盒10mg 0.312-20 ng/mL7-基去氫表雄 DEHYDROISOANDROSTERONE, 7-KETO(7-KETO DHEA)(P)

IL-27抗體,兔單抗 60-18-4 100mg 0.999ELISA   L-酪氨酸

ELISAKitforHumanCaspase-881740-07-0 20mg praeruptorin B 31.2-2000 pg/mL白花前胡乙素

NGF/NGFB抗體,兔多抗,抗原親和純化 591-78-6 1mL 0.993ELISA   2-己

犬惡絲蟲PCR檢測(cè)試劑盒說明書6132-04-3 Trisodium Citrate Dihydrate  1545801 改良番茄汁培養(yǎng)基/改良番茄汁瓊脂/TomatoJuiceAgarModified

假馬齒莧皂苷 C BACOPASAPONIN C(P)  5mg ELISAKitforHumanTumornecrosisfactoralpha-inducedprotein2

ECHINACEA PURPUREA STANDARDS KIT(P)  3 x 5mg 人絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶PP1-α催化亞基(PP-1A)ELISA試劑盒

脂溶性維生素標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒（10種） VITAMIN STANDARDS KIT: FAT SOLUBLE(RG)  10 x 250mg UCP1抗體,兔多抗,抗原親和純化

1,2,4-三氯苯  1g  0.997 CNDP1抗體,鼠單抗

wako 153233-36-4 用于氨基酸自動(dòng)分析  153233-36-4 甘露高鹽瓊脂/甘露鹽瓊脂/甘露氯化鈉瓊脂/MannitolSaltAga

酸棗仁皂苷B 20mg Jujuboside B ELISAKitforHumanAmphiregulin HPLC≥98%

Polytetrahydrofuran聚合物標(biāo)準(zhǔn)品  PTHF1K 肉浸液瓊脂/MeatInfusionAgar