粗球孢子菌PCR檢測試劑盒說明書 返回列表頁

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。

特點(diǎn)：
高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴(kuò)增；
高靈敏度：檢測靈敏度可達(dá)10~100；
操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時進(jìn)行多個檢測；
高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

樣品 DNA 的制備：
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）。
稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對照。
2.標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭，在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
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使用及效果：
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

腸道病毒通用型(EV-U)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法) 20mgSaikosaponin BUV≥98% 0.312-20 ng/mL柴胡皂苷B；柴胡皂甙B

IL32抗體,兔單抗 23696-28-8 100mg 0.982ELISA   喹乙

ELISAKitforHumanC-Cchemokinereceptortype5528-63-210mg galgravin 0.312-20 ng/mL蓋爾格拉文

ELISAKitforHumanADP/ATPtranslocase31g 0.156-10 ng/mL膽固 CHOLESTEROL(SG)

硝酸鹽肉湯100g 250gEDTA Na2 乙二胺四乙酸二鈉

ELISAKitforHumanMyelin-oligodendrocyteglycoprotein500G 0.312-20 ng/mL4'-溴乙酰苯胺 4'-Bromoacetanilide >98.0%(GC)

5%糖發(fā)酵管130-02491 20支2-丁

小鼠腺成纖維細(xì)胞 20mg HPLC≥98%Orcinol glucosid用于含量測定5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶苔葡萄糖苷；地衣二葡萄糖苷

TNFR2/CD120b/TNFRSF1B抗體,兔單抗1GELISA   溴百里藍(lán) Bromothymol Blue

ELISAKitforHumanArachidonate12-lipoxygenase,12S-type6681-18-1 20mgMagnoflorine chloride HPLC≥98% 0.78-50 ng/mL氯化木蘭花堿； 木蘭花堿氯化物

NBL1/DAND1/DAN抗體,兔多抗10mgELISA   腺苷-5'-單磷酸鈉鹽 ADENOSINE-5'-MONOPHOSPHATE SODIUM SALT(SH)

APOA4/ApolipoproteinA-IV抗體,兔多抗,抗原親和純化122-32-7C57H104O6Triolein≥98%ELISA   甘油三油酸酯

ELISAKitforHumanUncharacterizedproteinKIAA1377100mg 7.8-500 ng/mL(+/-)-兒茶素水合物 CATECHIN, DL-(RG)

李氏菌增菌肉湯（LB1,LB2）基礎(chǔ)顆粒1g 5g 225ml/袋*10菲洛

Andrade氏糖類肉湯/安德雷德氏糖類肉湯/Andrade,sCarbohydrateBrothRZ3.0細(xì)菌的糖發(fā)酵試驗(yàn)辣根過物酶

ELISAKitforHumanVisinin-likeprotein110mg 31.2-2000 pg/mL木香烴內(nèi)酯 COSTUNOLIDE(AS)

粗球孢子菌PCR檢測試劑盒說明書Timentin 特美汀（新型革蘭氏陰性菌抗生素）  3.2g LB肉湯顆粒

白花前胡素  HPLC≥98% Praeruptorin A 人體肝癌細(xì)胞，YY8103細(xì)胞 用于含量測定

大薊苷 20mg  Pectolinarin ELISAKitforHumanC-X-Cmotifchemokine16

黃曲素 G2 AFLATOXIN G2(RG)  10mg ELISAKitforTestosterone

5-溴尿嘧啶 5-Bromouracil >98.0%(T)  25G ELISAKitforHumanStromelysin-1

棕櫚酸  palmitic acid KLK13/Kallikrein13抗體,兔單抗 ≥98%

對羥基苯酸異丁酯  100mg  0.993 IL-1RA/IL1RN抗體,兔單抗

枸櫞酸；檸檬酸 20mg Citric Acid ELISAKitforAcetylcholine HPLC≥98%