?。?）取3g樣品，參加10樣品重的多聚聚乙烯pyrrole烷酮（PVPP），用液氮研磨成齏粉狀，將齏粉分為每份約3g，并儲藏于-80℃下。
　　
　?。?）在50mlfalcon管中參加20ml提出取得緩和沖突液。提出取得液的組變成0.2mol/L脫水四硼酸鈉（sodiumtetriboratedecahydrate）、30mmol/L乙二胺四乙酸（EDTA）、1（W/V）十二烷基硫酸鈉（SDS）、1脫氧氣膽酸鈉鹽。再參加0.0309g二硫蘇糖（DTT）、200ul乙基苯基聚甘醇（NP-40）和0.4g聚乙烯pyrrole烷酮（PVP-40），并置于80℃下均衡15min。抽取于-80℃中保留樣品，參加熱均衡后的提出取得緩和沖突液，振動混勻。再參加800ul蛋白酶K（20mg/ml），蓋好管蓋，平放于轉(zhuǎn)速為120r/min、溫度為42℃搖床上，搖擺提出取得1.5h。
　　
　?。?）在這以后，向樣品管中加人1.6ml2mol/LKCl，振動混勻，將樣品管置于4℃條件下1~1.5h。將提出取得液轉(zhuǎn)移至玻璃離心管中，在4℃條件下以12000×g離心20min。取上清液置于新的玻璃離心管中，參加1/4（或1/3）大小8mol/LLiCl（~20℃），振動混勻，于4℃安放過夜。4℃下以12000×g離心20min，去除上清液，RNA沉淀停留不動于管底。參加3~5ml冷的2mol/L（4℃）LiCl，輕緩振動，4℃下以12000×g離心10min，去除上清液。重復(fù)2mol/LLiCl清洗2~3次，一直到上清中無色素類事物。
　　
　?。?）用2ml10mmol/L。Tris-HCl（pH7.5）充分溶解沉淀，4℃下以12000×g離心10min，去除不溶性的沉淀，將上清液轉(zhuǎn)移至15ml玻璃離心管中，參加200ul（1/*?。┑?mol/LCH3COOH鉀（pH5.5）。于4℃溫浴中放30min。4℃下以12000×g離心10min。將上清液轉(zhuǎn)移至新的玻璃離心管中，參加2.5倍大小的100酒精，搖勻并置于-80℃條件下沉降RNA1~2h。
　　
　?。?）4℃下9800×g離心30min，去除上清液，RNA沉淀停留不動于管底。用1~2ml70冷酒精（-20℃）清洗沉淀，4℃下9800×g離心5min，去除上清液。室溫下干燥RNA沉淀（20~30min）至管內(nèi)無水珠。
　　
　?。?）用200ul通過焦碳酸二酒精（DEPC）處置的超純水充分溶解沉淀。溶解液轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中，再用100ul通過DEPC處置的超純水清洗原管壁和管底，將清洗液合并于RNA溶解沉淀中，參加1/*小3mol/LCH3COOH鈉（pH5.2）和2.5倍大小的100冷酒精，混勻后安放于-20℃沉降RNA1h?；旌弦涸?℃下以16000×g離心30min，去除上清液，用1~2ml70冷酒精（-20℃）清洗管底停留不動的RNA沉淀，4℃下以9800×g離心5min，去除上清液，RNA沉淀停留不動管底。
　　
　　（7）RNA沉淀于室溫下干燥20~30min。用數(shù)量適宜通過EDPC處置的超純水（100~300ul）溶解RNA沉淀，RNA液置于-80℃條件下可長時(shí)期保留，或用于剖析。