生物制藥純化工藝中，總會(huì)碰到性質(zhì)比較接近、較難分離的分子。如何選擇合適的填料應(yīng)用，已成為純化小伙伴的必備技能。百林科“六邊形戰(zhàn)士”羥基磷灰石填料，適用于不同純化應(yīng)用領(lǐng)域的各個(gè)階段，實(shí)現(xiàn)一切不可能。
羥基磷灰石[Ca10(PO4)6(OH)2]是一種無機(jī)純相層析介質(zhì)，高溫焙燒成球體，其晶體結(jié)構(gòu)與骨羥基磷灰石相同，且球體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，粒徑均勻。
? 特殊的分離特性，可同時(shí)實(shí)現(xiàn)陽離子交換和鈣金屬親和兩種分離機(jī)制
? 增加使用壽命
? 高動(dòng)態(tài)結(jié)合載量
? 良好的批次重復(fù)性
獨(dú)特的分離機(jī)制和選擇性，使羥基磷灰石成為下游工藝中不可或缺的層析介質(zhì)。本文將列舉羥基磷灰石純化不同生物分子的案例，可用于捕獲、中度純化或精純等不同階段，對(duì)宿主蛋白(HCP)、二聚體、宿主核酸(HCD)、rProtein A等呈現(xiàn)較好的去除效果。
CHT在純化應(yīng)用上的選擇
CHT多領(lǐng)域應(yīng)用案例介紹
1 抗體應(yīng)用案例
? 樣品信息：雙抗陰離子流穿液
? 層析柱：10*250 mm，20 ml
? Buffer A: 5mM Na2SO4, 0.1M NaCl, pH 6.8
? Buffer B: 5mM Na2SO4, 1M NaCl, pH 6.8
圖2：BaronCHT type I ，40μm雙抗洗脫峰
表1：數(shù)據(jù)匯總
小結(jié)：BaronCHT 填料對(duì)于聚集體和HCP均有去除能力，且回收率滿足預(yù)期。
2 重組因子類對(duì)照案例
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| 圖3：百林科 II型 洗脫圖譜 | 圖4：進(jìn)口友商 II型洗脫圖譜 |
表2：數(shù)據(jù)匯總
小結(jié)：較進(jìn)口友商同步對(duì)照，性能表現(xiàn)相當(dāng)。
3 mRNA應(yīng)用案例
推薦測試條件
? Column: CHT II型
? Buffer A：5mM PB，0.1M NaCl，2 mM CaCl2, pH 7.0
? Buffer B：500mM PB，0.1M NaCl，2 mM CaCl2 ，pH 7.0
? Eluction: 0~100%B 10CV
圖51：mRNA洗脫圖譜
小結(jié)：CHT可應(yīng)用于mRNA的捕獲，對(duì)于LC編碼的mRNA有較好的回收率和純度預(yù)期。
4 AAV應(yīng)用案例
推薦測試條件
? Column: CHT I型
? Buffer A：5mM PB，0.15M NaCl，2 mM CaCl2, pH 7.2
? Buffer B：500mM PB，0.1M NaCl，2 mM CaCl2 ，pH 7.2
? Eluction: 0~100%B 10CV
圖62：AAV應(yīng)用數(shù)據(jù)
小結(jié)：CHT I型填料在AAV載體有不錯(cuò)應(yīng)用表現(xiàn)，Buffer條件中加入鈣離子可以有效提高AAV載體的回收率。
SUMMARY
盡管羥基磷灰石作為“六邊形戰(zhàn)士”功能很多，但是大家在使用過程中要注意緩沖液pH不能低于6.5，且溶液中不能含有檸檬酸或 EDTA組分，避免導(dǎo)致羥基磷灰石降解。近期，我們也會(huì)針對(duì)羥基磷灰石使用過程中的各類問題進(jìn)行梳理解答，歡迎繼續(xù)關(guān)注百林科“純化小技巧”系列。
參考文獻(xiàn)：
1. Cui T, Fakhfakh K, Turney H, et al.Comprehensive studies on building a scalable downstream process for mRNAs to enable mRNA therapeutics. Biotechnol.Prog. 2023;39(1):e3301. doi:10.1002/btpr.3301
2. Mikako W , Naoya U, Guillermo P, et al. Large-scale puri?cation of functional AAV particles packaging the full genome using short-term ultracentrifugation with a zonal rotor. Gene Therapy.
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