如果您采用真核表達(dá)系統(tǒng),需要將發(fā)酵液直接上柱純化;亦或是樣品中含有EDTA等還原劑,該如何應(yīng)對?百林科全新一代親和填料Ni Chromstar Excel助您快速通關(guān)!這款產(chǎn)品耐受100mM EDTA,適用于真核分泌表達(dá)的His標(biāo)簽蛋白純化,眾多優(yōu)勢如虎添翼。
關(guān)于His標(biāo)簽
His標(biāo)簽由多個組氨酸殘基構(gòu)成(6個最為常見),由于組氨酸上的N原子能夠與某些過渡金屬離子形成配位鍵,利用這一特性,可以使用含有金屬離子配基的填料來捕獲和純化His標(biāo)簽重組蛋白。其特點如下:
?? 分子量小,基本不影響蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能。
?? 組氨酸的咪唑環(huán)結(jié)構(gòu),可以結(jié)合二價金屬離子,咪唑和組氨酸標(biāo)簽競爭性的結(jié)合在二價金屬離子上,加入高濃度的咪唑即可將組氨酸標(biāo)簽蛋白洗脫下來。
?? 具有成本低、易表達(dá)等特點,是目前最為常用的蛋白標(biāo)簽。
鎳柱親和層析原理
通常大家所接觸的IDA、NTA和TED的不同螯合形式,就是基于鎳離子的不同螯合策略實現(xiàn)。鎳離子為六價,IDA偶聯(lián)需要占用其三個位點,還剩余三個位點結(jié)合His標(biāo)簽;第二種偶聯(lián)方式NTA則是占據(jù)鎳離子的四個位點,剩余兩個位點結(jié)合His標(biāo)簽;而第三種方式TED偶聯(lián)則需要占據(jù)五個位點,剩余1個位點結(jié)合His標(biāo)簽。
占據(jù)位點越多則鎳離子被抓的越“牢固”,載量會相應(yīng)的降低,若蛋白樣品中有高濃度的螯合劑如EDTA等,則需要選擇TED偶聯(lián)的鎳填料,減少鎳離子的脫落。
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IDA | NTA | TED |
百林科在標(biāo)簽蛋白純化領(lǐng)域擁有種類廣泛、質(zhì)量優(yōu)異的Ni系列產(chǎn)品。今天,我們將為大家重點介紹百林科層析填料新品——Ni Chromstar Excel。
這是一款親和層析介質(zhì),將過渡金屬離子 Ni2+ 預(yù)先螯合在以 TED為配基的 Chromstar 基架上制成。 該層析介質(zhì)利用 Ni2+ 與蛋白質(zhì)上某些氨基酸(主要是組氨酸)的側(cè)鏈之間的相互作用,實現(xiàn)含有與不含有 這些氨基酸、含有這些氨基酸數(shù)量多與少的蛋白質(zhì)的分離純化,具有明顯優(yōu)勢:
?? 耐受 100 mM EDTA
?? 應(yīng)用于分泌真核培養(yǎng)液上清中的組氨酸蛋白的捕獲或純化
?? >10 mg 組氨酸標(biāo)簽蛋白 /ml 層析介質(zhì)
?? 耐受堿洗,無需脫鎳掛鎳,有效避免交叉污染
?? 一步純度可達(dá)90%以上
?? 較好的批間一致性
圖1: Ni Chromstar Excel系列產(chǎn)品
應(yīng)用案例--
含100 mM EDTA的耐受測試
測試條件
• 樣品信息:含100 mM EDTA的His蛋白上清液
• 層析柱:0.77*10 cm,4.7ml
• Buffer A: 20mM PB, 0.5M Nacl, 20mM 咪唑
• Buffer B: 20mM PB, 0.5M NaCl, 500mM 咪唑
圖2:Ni Chromstar Excel 層析圖譜
圖3:Ni Chromstar FF層析圖譜
圖4:Ni Chromstar Excel膠圖
圖5:Ni Chromstar FF膠圖
圖6:使用后,Ni Chromstar Excel(左側(cè))顏色無變化,Ni Chromstar FF(右側(cè))藍(lán)色基本消失
表1:數(shù)據(jù)匯總
SUMMARY
以上峰圖和膠圖可見,Ni Chromstar Excel較FF相比,能夠耐受100 mM EDTA,一步捕獲純度達(dá)到90%,性能表現(xiàn)優(yōu)異,洗脫后層析柱較使用前無顏色變化。
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