Bst 4.0 SYBR Green Bead

商品屬性：

產(chǎn)品介紹：

該制品為全體系凍干微球制品，內(nèi)含恒溫?cái)U(kuò)增所用的反應(yīng)緩沖液、SYBR Green 熒光染料、Mg2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶等，使用時(shí)只需要加入引物、模板即可進(jìn)行核酸恒溫?cái)U(kuò)增。Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依賴于 RNA 模板的聚合酶活性（逆轉(zhuǎn)錄），還具有依賴于 DNA 的聚合酶活性，因此無(wú)論 DNA 或 RNA 樣本均可使用該制品進(jìn)行恒溫?cái)U(kuò)增。該制品是進(jìn)行 LAMP 及RT-LAMP 擴(kuò)增反應(yīng)的試劑。
SYBR Green 系列產(chǎn)品為實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)的專用試劑，可直接在恒溫?zé)晒鈨x或定量 PCR 以上進(jìn)行 LAMP 反應(yīng)擴(kuò)增。
儲(chǔ)存：-20℃保存 2 年；室溫（25℃）保存>6 個(gè)月。
使用凍干微球進(jìn)行全擴(kuò)增體系用品的制備方法：將優(yōu)化的擴(kuò)增引物分裝于 0.2 ml EP 管底部，于 70-80℃條件烘干1-2h。烘干后的 0.2 ml EP 管已經(jīng)含有干燥的擴(kuò)增引物，再加入一粒凍干微球即可制備成全擴(kuò)增體系干燥品，該干燥品無(wú)需冷鏈運(yùn)輸，可長(zhǎng)期保存。
反應(yīng)體系說(shuō)明：每一個(gè)凍干微球?yàn)榘凑?25 μl 反應(yīng)體系建立，在使用時(shí)只需要加入 25 μl 的 ddH2O 或模板即可進(jìn)行反應(yīng)。
使用實(shí)例，進(jìn)行 LAMP 熒光擴(kuò)增
1. 配制熒光 LAMP 反應(yīng)體系在 0.2 ml EP 反應(yīng)管中加入下述試劑
Bst 4.0 SG Bead 1 粒
10xLAMP Primer Mix 2.5 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到液體總量 25 μl
10xLAMP Primer Mix 濃度：FIP/BIP 分別為 16 μM、LoopF/B 分別為 4-8 μM、F3/B3 分別為 2 μM。
2. 反應(yīng)體系配好后，置于熒光定量 PCR 儀中于 65°C進(jìn)行反應(yīng) 15~30min。1min 收集一次熒光信號(hào)。讀取擴(kuò)增曲線進(jìn)行陰性和陽(yáng)性判讀。
3. 根據(jù)熒光擴(kuò)增曲線判讀陽(yáng)性和陰性。
注意事項(xiàng)：
（1）關(guān)于礦物油的使用，在配制完 LAMP 反應(yīng)體系后，可加入一滴礦物油覆蓋于反應(yīng)液上部，可以有效的減少氣溶膠的污染。實(shí)驗(yàn)證明礦物油并不影響機(jī)器的熒光數(shù)值讀取。
（2）關(guān)于擴(kuò)增曲線的異常：由于 LAMP 擴(kuò)增速度較快，熒光信號(hào)讀取可能存在矯正計(jì)算問(wèn)題，這與熒光設(shè)備的軟件算法有管。在有些熒光 PCR 儀上，在相對(duì)熒光模式下，表現(xiàn)出曲線飛峰、終點(diǎn)曲線下降的問(wèn)題。此時(shí)調(diào)整到原始熒光值模式下觀察結(jié)果，或致電相應(yīng)設(shè)備供應(yīng)商進(jìn)行咨詢。

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