本網(wǎng)站銷售的所有產(chǎn)品均不得用于人類或動物之臨床診斷或治療,僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS632164 | 總抗氧化能力(FRAP法)測試盒(比色法) | 100管/96樣 |
AS632164 | 總抗氧化能力(FRAP法)測試盒(比色法) | 50管/48樣 |
注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
研究意義:
測定對象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平。在生物學、醫(yī)學和藥學研究中常常檢測血漿、血清、唾液、尿液等各種體液,細胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。
測定原理:
在酸性環(huán)境下,還原Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)產(chǎn)生藍色的Fe2+-TPTZ的能力反映了總抗氧化能力。
自備實驗用品:
恒溫水浴鍋、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,使用前預冷。
試劑一:液體15mL×1瓶,避光保存。
試劑二:液體1.5mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體1.5mL×1瓶,避光保存。
混合液(現(xiàn)配現(xiàn)用):將試劑一、試劑二、試劑三按10:1:1的比例混合,使用前37℃預溫。
樣品的制備:
(1) 血清、血漿、唾液或尿液等液體樣品
血漿(制備時可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝,不宜使用EDTA抗凝)4℃,5000rpm 離心10min,取上清待測。血清、唾液或尿液樣品直接用于測定,也可以-80℃凍存(不宜超過30 d)后再測定。
(2) 組織樣品
按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后10000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
(3) 細胞樣品
按照細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎(功率200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);10000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
操作步驟:
分光光度計/酶標儀預熱30min,調(diào)節(jié)波長至593nm,蒸餾水調(diào)零。
操作表
空白管 | 測定管 | |
混合液(μL) | 180 | 180 |
樣品(μL) | 6 | |
雙蒸水(μL) | 24 | 18 |
充分混勻,反應20min,于微量石英比色皿/96孔板,測定593nm吸光值,△A= A測定-A空白 |
注意:空白管只需測定一次。
總抗氧化能力計算公式:
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線:y=0.8442x-0.0048,R2=0.9979
按樣本質(zhì)量計算
單位定義:每g樣本每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個酶活力單位。
總抗氧化能力(U/g 鮮重)=(△A+0.0048)÷ 0.8442×1000×V樣÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=59.228×(△A+0.0048)÷W
按樣本蛋白濃度計算
單位定義:每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個酶活力單位。
總抗氧化能力(U/mg prot)=(△A+0.0048)÷0.8442×1000×V樣÷(V樣÷V樣總×Cpr)÷T
=59.228×(△A+0.0048)÷Cpr
按細胞計算
單位定義:每萬個細胞每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個酶活力單位。
總抗氧化能力(U/104cell)=(△A+0.0048)÷0.8442×1000×V樣÷(V樣÷V樣總×細胞數(shù)量(萬個))÷T
= 59.228×(△A+0.0048)÷ 細胞數(shù)量(萬個)
按液體體積計算
單位定義:每毫升樣本每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個酶活力單位。
總抗氧化能力(U/mL)=(△A+0.0048)÷0.8442×1000÷T
= 59.228×(△A+0.0048)
V樣總:加入提取液體積,1 mL;V樣:反應中樣品體積,6μL;T:反應時間,20min;W:樣品質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線:y = 0.4221x - 0.0048;R2=0.9979
按樣本質(zhì)量計算
單位定義:每g樣本每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個酶活力單位。
總抗氧化能力(U/g 鮮重)=(△A+0.0048)÷0.4221×1000×V樣÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=118.455×(△A+0.0048)÷W
按樣本蛋白濃度計算
單位定義:每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個酶活力單位。
總抗氧化能力(U/mg prot)=(△A+0.0048)÷0.4221×1000×V樣÷(V樣÷V樣總×Cpr)÷T
=118.455×(△A+0.0048)÷Cpr
按細胞計算
單位定義:每萬個細胞每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個酶活力單位。
總抗氧化能力(U/104cell)=(△A+0.0048)÷0.4221×1000×V樣÷(V樣÷V樣總×細胞數(shù)量(萬個))÷T
= 118.455×(△A+0.0048)÷ 細胞數(shù)量(萬個)
按液體體積計算
單位定義:每毫升樣本每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個酶活力單位。
總抗氧化能力(U/mL)=(△A+0.0048)÷0.4221×1000÷T
= 118.455×(△A+0.0048)
V樣總:加入提取液體積,1 mL;V樣:反應中樣品體積,6μL;T:反應時間,20min;W:樣品質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL
注意事項:
試劑二對人體有刺激性,請采取適當?shù)姆雷o措施。為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴乳膠手套操作。
盡量避免使用在酸性條件下呈藍色或接近藍色的試劑,否則對本試劑盒的檢測結(jié)果產(chǎn)生干擾。
樣品中不宜添加Tween、Triton和NP-40等去垢劑和DTT、巰基乙醇等影響氧化還原反應的還原劑。
公司正在出售的產(chǎn)品:
ESA ELISA Kit | Ⅰ型前膠原羧基末端前肽ELISA試劑盒 |
anti-hepatitis A virus IgG antibody,anti-HAV ELISA Kit | BTG3關(guān)聯(lián)核蛋白ELISA試劑盒 |
Artemin蛋白ELISA試劑盒 | CD5分子ELISA試劑盒 |
Cathelicidin抗菌肽ELISA試劑盒 | Dystonin蛋白ELISA試劑盒 |
大鼠可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA Kit | 大鼠TGF-β誘導早期基因1(TIEG1) 試劑盒 ELISA |
腺苷三磷suan結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白G2ELISA試劑盒 | 雞轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)檢測試劑盒elisa |
人CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISA試劑盒 | Cornulin蛋白ELISA試劑盒 |
豬腫瘤壞死因子α(TNF-α)試劑盒elisa | 綿羊副流感病毒3型RT-PCR試劑盒 |
鮭魚立克次氏體PCR檢測試劑盒 | 土拉熱弗朗西斯菌PCR檢測試劑盒 |
木鼠布魯氏菌PCR試劑盒 | 鼠疫耶爾森菌 plagenePCR試劑盒 |
人分枝桿菌PCR檢測試劑盒 | 海水派琴蟲PCR試劑盒 |
羊血吸蟲PCR檢測試劑盒 | PI 大鼠胰島su原ELISA檢測試劑盒 |
Bcl-2 豬B細胞淋巴瘤因子2ELISA檢測試劑盒 | 鮭魚傳染性貧血病毒PCR檢測試劑盒 |
BAX 豬Bcl-2相關(guān)X蛋白ELISA檢測試劑盒 | 同豬皰疹病毒型豬巨細胞病毒PCR檢測試劑盒 |
胰島su抗體(Anti-Ins)ELISA試劑盒 | Aβ1-40 兔β淀粉樣蛋白1-40ELISA檢測試劑盒 |