嵌合抗體（Chimeric Antibody）是指來(lái)源于一種物種的抗體可變區(qū)與另外一種物種的恒定區(qū)片段進(jìn)行嵌合后形成完整的IgG抗體，如人-鼠，人-兔，鼠-兔，人-羊駝嵌合抗體等。不同物種的嵌合抗體改造主要是為了改善親本抗體的免疫原性，種屬特性，半衰期等特性，其核心訴求是獲得抗體的可變區(qū)序列，借助于噬菌體展示技術(shù)和酵母抗體展示技術(shù)，可以發(fā)現(xiàn)多種物種的單克隆抗體，進(jìn)而獲得不同來(lái)源的嵌合抗體。
2014 年，WHO（世界衛(wèi)生組織）發(fā)布了新指南，重新定義了不同類別的治療性抗體。其 INN（國(guó)際非專有名稱）抗體藥物命名法將治療性抗體分為 3 類：嵌合型或"-ximab，人源化或"-zumab，全人源或"-umab。
根據(jù)世衛(wèi)組織命名法對(duì)特定抗體進(jìn)行分類，來(lái)源于小鼠（或更普遍的非人類）序列的抗體將被歸類為-祖馬抗體，而來(lái)源于人類（噬菌體展示、轉(zhuǎn)基因小鼠或 B 細(xì)胞克隆技術(shù)）的抗體將被歸類為-烏馬單抗。在一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目中，與 IMGT 數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行 BLAST 的小鼠抗體通常會(huì)在 VL 結(jié)構(gòu)域顯示出與較接近的人類種系約 65-80% 的同一性，在 VH 結(jié)構(gòu)域顯示出 60-75% 的同一性。因此，要想在 VH 結(jié)構(gòu)域達(dá)到所需的同一率，通常需要對(duì) CDR 中的一些殘基進(jìn)行突變。因此，在人源化過(guò)程中需要對(duì) CDR（根據(jù) Kabat 的定義）進(jìn)行突變，以達(dá)到 VH 結(jié)構(gòu)域 85% 的同一性。
泰克生物是一家專業(yè)的嵌合抗體的構(gòu)建與生產(chǎn)公司，擁有成熟的重組抗體哺乳表達(dá)平臺(tái)，能為客戶提供高質(zhì)量的嵌合抗體表達(dá)定制服務(wù)。全套Gibco無(wú)血清哺乳細(xì)胞培養(yǎng)，配合來(lái)源清晰的293F，CHO懸浮細(xì)胞系，整個(gè)體系滿足于不同客戶對(duì)天然構(gòu)象蛋白的體外重組表達(dá)需求。泰克生物為客戶提供的全套高性價(jià)比研究服務(wù)滿足GMP-like體系，包括細(xì)胞種子庫(kù)來(lái)源文件記錄體系、細(xì)胞種子批檢定，動(dòng)物源成分的質(zhì)控，標(biāo)準(zhǔn)化細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)化操作流程等。
█ 嵌合抗體的分類
嵌合抗體種類 | 簡(jiǎn)介 | 嵌合原理 |
嵌合IgG抗體 | 在免疫過(guò)程中，抗體Fc段能與效應(yīng)細(xì)胞發(fā)生相互作用，從而發(fā)揮特異的生物學(xué)功能；IgG1和IgG3與Fc受體的結(jié)合能力較強(qiáng)，IgG4次之，IgG2幾乎檢測(cè)不到結(jié)合。 | 構(gòu)建嵌合抗體首先需從生產(chǎn)鼠源單抗的雜交瘤細(xì)胞中得到V區(qū)基因，再與人類的C區(qū)基因重組并克隆到合適載體中，然后轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞表達(dá)。 |
嵌合Fab和F（ab'）2抗體 | 該種抗體的優(yōu)勢(shì)是滲透力強(qiáng)，由于該類型抗體的親和力較低，分子量小，很容易被腎小球過(guò)濾而從血液中消失，因此，大多數(shù)不適合單獨(dú)用于臨床治療。 | 將功能性抗體L，H鏈的V區(qū)基因與人的輕鏈K和H進(jìn)行重組，然后再轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞中表達(dá)。 |
█ 人鼠嵌合抗體構(gòu)建策略
1.模板替換：與鼠對(duì)應(yīng)部分有較大同源性的人抗體FR替換鼠FR，利用已有晶體結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)的人源抗體的可變區(qū)框架（VH如NEW，KOL，VL如REI等)用作替換的基本模板或在已有的抗體序列庫(kù)中搜尋與鼠McAb FR有同源性的人源FR用于替換。
2.表面重塑：對(duì)鼠CDR及FR表面殘基進(jìn)行鑲飾（veneering）或重塑（resurfacing），以使之類似于人抗體CDR的輪廓（profile）或人 FR 的型式。
3.補(bǔ)償變換：在人FR選擇與CDR有相互作用、與抗體的親和力有密切關(guān)系或?qū)R空間結(jié)構(gòu)折疊起關(guān)鍵作用的殘基進(jìn)行改變，以補(bǔ)償CDR移植。
4.定位保留：人源化McAb保留了鼠源McAb可變區(qū)中參與抗原結(jié)合的氨基酸殘基，包括CDR和FR中的一些關(guān)鍵殘基。
█ 嵌合抗體設(shè)計(jì)與表達(dá)服務(wù)周期
步驟 | 服務(wù)內(nèi)容 | 周期 |
基因克隆及載體構(gòu)建 | * 擴(kuò)增/鑒定基因片段或合成目的基因，插入哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒 * PCR及測(cè)序檢測(cè)確定亞克隆基因 * 交付：測(cè)序數(shù)據(jù)和實(shí)驗(yàn)方案 | 1-2周 |
瞬時(shí)蛋白表達(dá) | * 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞(293F， CHO) ：瞬時(shí)表達(dá) * SDS-PAGE和WB檢測(cè) * 交付：表達(dá)載體，克隆菌株，重組抗體，純度>85% | 2–3周 |
穩(wěn)定表達(dá)（可選） | * 重組蛋白CHO穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系構(gòu)建和篩選 * 交付：穩(wěn)定細(xì)胞系，構(gòu)建報(bào)告；邊際產(chǎn)物，3個(gè)克隆，每個(gè)克隆50ml發(fā)酵產(chǎn)物及純化產(chǎn)物 | 12–14周 |
█ 泰克服務(wù)優(yōu)勢(shì)
? 可變區(qū)多種屬選擇：人、小/大鼠、犬、雞、駱駝等
? 免費(fèi)重組嵌合抗體表達(dá)方案設(shè)計(jì)
? 有自主優(yōu)化的HEK293/CHO平臺(tái)能夠進(jìn)行更好的糖基化及翻譯后修飾
? 自主設(shè)計(jì)哺乳體系表達(dá)載體
? 過(guò)重規(guī)格的放大表達(dá)體系可供選擇
? 恒定區(qū)有多種屬選擇：人、大/小鼠、犬、恒河猴、兔等
? 具有多亞型構(gòu)建的經(jīng)驗(yàn)：IgG、IgA、IgM和IgE
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