厭氧培養(yǎng)箱YQX-11 厭氧菌培養(yǎng)
厭氧菌標(biāo)本的送檢方法與處理:
標(biāo)本送到實(shí)驗(yàn)室后,應(yīng)在20~30min內(nèi)處理完畢,不超過(guò)2h,以防止標(biāo)本中兼性厭氧菌過(guò)度繁殖而抑制厭氧菌的生長(zhǎng)。如不能及時(shí)接種,可將標(biāo)本置室溫保存(一般認(rèn)為,冷藏對(duì)某些厭氧菌有害,而且在低溫時(shí)氧的溶解度較高)。
1)針筒運(yùn)送:一般用無(wú)菌針筒抽取標(biāo)本后,排盡空氣,針頭插入無(wú)菌橡皮塞,以隔絕空氣,立即送檢。這種方法多用于液體標(biāo)本的運(yùn)送,如血液、膿液、胸腹水、關(guān)節(jié)液等醫(yī).學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。
2)無(wú)菌小瓶運(yùn)送:一般采用無(wú)菌的小瓶,瓶?jī)?nèi)加一定量的培養(yǎng)基和少量氧化還原指示劑,用橡皮蓋加鋁蓋固定密封,排除瓶?jī)?nèi)空氣,充以C02氣體。同時(shí)先觀察瓶?jī)?nèi)氧化還原指示劑的顏色,以判斷瓶?jī)?nèi)是否為無(wú)氧環(huán)境,如合格將用將液體標(biāo)本注入瓶中即可。
3)棉拭子運(yùn)送:一般不采用棉拭子運(yùn)送,如果使用該方法,一定使用特制,確保無(wú)氧環(huán)境,確保不被污染,確??焖偎蜋z。
4)厭氧罐或厭氧袋運(yùn)送:將厭氧罐或厭氧袋內(nèi)裝入可有效消耗氧氣的物質(zhì),確保無(wú)氧環(huán)境。該方法一般用于運(yùn)送較大的組織塊或床邊接種的培養(yǎng)皿等。
厭氧菌的分離培養(yǎng):
厭氧菌的分離培養(yǎng)主要分初代培養(yǎng)和次代培養(yǎng)兩個(gè)階段,其中初代培養(yǎng)相對(duì)比較困難,關(guān)鍵的問(wèn)題就是厭氧環(huán)境和培養(yǎng)基的選擇。初代培養(yǎng)的一般原則是:
1)先將標(biāo)本涂片染色直接鏡檢,指導(dǎo)培養(yǎng)基的選擇。
2)盡量選用在厭氧菌中覆蓋面寬的非選擇性培養(yǎng)基。
3)多選1~2種覆蓋面不同的選擇性培養(yǎng)基。
4)盡量保證培養(yǎng)基新鮮。
5)要考慮到微需氧菌存在的可能。
選用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基接種:應(yīng)接種固體和液體兩種培養(yǎng)基;
(1)培養(yǎng)基的使用,應(yīng)注意下列各點(diǎn):
1)盡量使用新鮮培養(yǎng)基,2~4h內(nèi)用完;
2)應(yīng)使用預(yù)還原培養(yǎng)基,預(yù)還原24~48h更好;
3)可采用預(yù)還原滅菌法制作的培養(yǎng)基(用前于培養(yǎng)基中加入還原劑,如L-半、硫乙醇酸鈉、及葡萄糖等,盡可能使預(yù)還原劑處于還原狀態(tài));
4)液體培養(yǎng)基應(yīng)煮沸10min,以驅(qū)除溶解氧,并迅速冷卻,立即接種;
5)培養(yǎng)厭氧菌的培養(yǎng)基均應(yīng)營(yíng)養(yǎng)豐富,并加有還原劑與生長(zhǎng)的刺激因子(血清、、氯化血紅素、聚山梨酯-80等)。
(2)培養(yǎng)基的選擇:初次培養(yǎng)一般都使用選擇培養(yǎng)基和非選擇培養(yǎng)基。
1)非選擇培養(yǎng)基:本培養(yǎng)基使分離的厭氧菌不被抑制,幾乎能培養(yǎng)出所有的厭氧菌。常使用心腦浸液瓊脂(BHI)、布氏瓊脂(BR)、胰豆胨肝粉瓊脂(GAM)、胰胨酵母瓊脂(EG)、CDC厭氧血瓊脂等。
2)選擇培養(yǎng)基:為有目的選擇常見(jiàn)厭氧菌株,以便盡快確定厭氧的種類(lèi)。
2.每份標(biāo)本至少接種3個(gè)血平板,分別置于有氧,無(wú)氧及5%~10à2環(huán)境中培養(yǎng),以便正確地培養(yǎng)出病原菌,從而判斷其為需氧菌、兼性厭氧菌、微需氧菌或厭氧菌中的哪一類(lèi)。
厭氧培養(yǎng)法:
(1)厭氧罐培養(yǎng)法。
(2)氣袋法。
(3)氣體噴射法:又稱(chēng)轉(zhuǎn)管法。
(4)厭氧手套箱培養(yǎng)法:是迄今厭氧菌培養(yǎng)的儀器之一。
(5)其他培養(yǎng)法:平板焦性沒(méi)食子酸法;生物耗氧法;高層瓊脂培養(yǎng)法。
厭氧狀態(tài)的指示:
美藍(lán)和刃天青。無(wú)氧時(shí)均呈白色,有氧時(shí)美藍(lán)呈藍(lán)色,刃天青呈粉紅色。
分離培養(yǎng)厭氧菌失敗的原因:
①培養(yǎng)前未直接涂片和染色鏡檢;
②標(biāo)本在空氣中放置太久或接種的操作時(shí)間過(guò)長(zhǎng);
③未用新鮮配制的培養(yǎng)基;
④未用選擇培養(yǎng)基;
⑤培養(yǎng)基未加必要的補(bǔ)充物質(zhì);
⑥初代培養(yǎng)應(yīng)用了硫乙醇酸鈉作為*厭氧菌培養(yǎng)基;
⑦無(wú)合適的厭氧罐或厭氧裝置漏氣;
⑧催化劑失活;
⑨培養(yǎng)時(shí)間不足;
⑩厭氧菌的鑒定材料有問(wèn)題。
厭氧培養(yǎng)箱YQX-11 厭氧菌培養(yǎng)厭氧菌的分離培養(yǎng)主要分初代培養(yǎng)和次代培養(yǎng)兩個(gè)階段,其中初代培養(yǎng)相對(duì)比較困難,關(guān)鍵的問(wèn)題就是厭氧環(huán)境和培養(yǎng)基的選擇