紅車軸提取物

紅車軸( Trifolium pratense L. )為豆科( Leguminosae)車軸草屬多年生草本植物，又名紅三葉草(Red Clover)、紅花苜蓿和三葉草等，因植物中含有較為豐富的異黃酮，其提取物已被廣泛應(yīng)用于各種保健品或飲食增補劑中，用于預(yù)防乳腺癌、 改善骨質(zhì)疏松、婦女更年期綜合癥等，許多國家因此將其納入法定標(biāo)準(zhǔn)，美國藥典-國家處方集的飲食增補劑分冊( Botanical official monographs in USP30-NF25)就收載紅車軸草植物、植物粉末、植物提取物、片劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。在我國，紅車軸草的植物資源十分豐富，南北各地均有野生分布和大面積栽培，每年對歐美市場出口大量的紅車軸草提取物。

【提取方法】

提取與分離紅車軸草干燥藥材3 kg，切段，以20倍量80%乙醇回流提取3 次，每次2 h，合并提取液，減壓濃縮得稠浸膏約400 g，所得浸膏以甲醇溶解，濾液加適量硅膠拌樣，進行硅膠(100～200目)柱層析，以石油醚、石油醚-乙酸乙酯、 乙酸乙酯-甲醇梯度洗脫，薄層色譜檢識跟蹤合并相同或相似洗脫流份，所得各洗脫部位再經(jīng)薄層層析硅膠柱層析，并結(jié)合SephadexLH-20凝膠柱層析、薄層制備、 反相液相制備色譜等方法，分離得到13個單體化合物，其中包括8個異黃酮成分和2個黃酮成分。

【藥理作用】

目前，已有一些研究表明紅車軸草異黃酮提取物對更年期綜合癥有改善作用，同時還有一些紅車軸草異黃酮提取物改善其他病癥的報道，如骨質(zhì)疏松癥、 心血管疾病、癌癥和經(jīng)期前綜合征等而這些功效均與其活性成分異黃酮有關(guān)。

已有報道指出染料木黃酮、大豆素、鷹嘴豆芽素A和刺芒柄花素具有過氧化物酶體增殖物激活受體（peroxisome proliferator activated receptor, PPAR）α和γ雙激動劑活性而它們是紅車軸草異黃酮提取物的主要組成成分。PPARs是核受體超家族成員之一，參與了脂肪細胞分化、脂代謝調(diào)節(jié)等重要的生理過程，它有三種亞型（α、β、γ），其中PPARα是肝臟中脂質(zhì)代謝酶類的主要轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，而PPARγ參與脂肪細胞分化和脂代謝調(diào)節(jié)，對胰島素敏感性也具有調(diào)節(jié)作用。 PPARα的一些激動劑如貝特類化合物已用于治療血脂異常，而PPARγ的一些激動劑如噻唑烷二酮類化合物等已用于糖尿病的臨床治療。

紅車軸草異黃酮可以顯著降低 db/db2型糖尿病小鼠血糖水平，但之前的研究發(fā)現(xiàn)紅車軸草異黃酮對1型糖尿病小鼠并未顯現(xiàn)出降血糖的作用，可能是由于1型糖尿病和2型糖尿病的發(fā)病機制不同：1型糖尿病是由于胰腺β細胞受損引起的自身的免疫反應(yīng)而發(fā)病；2 型糖尿病則是體內(nèi)周圍組織對胰島素的敏感性降低，而紅車軸草異黃酮中的主要組分鷹嘴豆芽素A和刺芒柄花素作為胰島素增敏劑改善了 db/db-糖尿病小鼠的胰島素耐受性，其確切機制還有待進一步的研究。

有一些研究報道了紅車軸提取物降甘油三酯、總膽固醇的作用。經(jīng)過紅車軸草異黃酮提取物的處理后，實驗小鼠的甘油三酯、總膽固醇等水平都得到了一定的降低，小鼠肝組織中APOC3的mRNA表達得到了下調(diào)。

最近研究發(fā)現(xiàn)紅車軸草異黃酮能夠通過提高雌激素作用，有效抑制骨吸收，降低骨轉(zhuǎn)化率，增強成骨細胞活性及骨密度，對骨質(zhì)疏松具有一定的防治作用。

在研究紅車軸提取物對破骨細胞數(shù)目及骨吸收過程中采用0.3 g/L、0.6 g/L和1.2 g/L 3個紅車軸草提取物質(zhì)量濃度，比較不同劑量紅車軸草對破骨細胞影響，發(fā)現(xiàn)隨著紅車軸草劑量的增加對破骨細胞的抑制作用增加，因此破骨細胞相關(guān)分化蛋白研究采用1.2 g/L紅車軸草劑量進行研究。破骨細胞給予紅車軸草提取物連續(xù)培養(yǎng)14 d，測定破骨細胞分化相關(guān)蛋白NFATc-1和c-fos結(jié)果發(fā)現(xiàn)，給予紅車軸草提取物能夠明顯降低NFATc-1和c-fos蛋白的表達，說明紅車軸草提取物可能通過降低NFATc-1和c-fos蛋白的表達，進而抑制破骨細胞分化。