biosharp CCK-8 試劑盒

細胞增殖-毒性檢測試劑盒

Cell Counting Kit-8 (CCK-8)    

產品簡介：

CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。WST-8是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑1-Methoxy PMS存在的情況下，可以被還原生成橙黃色水溶性的甲臜（Formazan）。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數(shù)目呈線性關系。

使用方法：

1、在96孔板中接種細胞懸液(100 ul /孔)，通常細胞增殖實驗每孔約2000個細胞，細胞毒性實驗每孔約5000個細胞，具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等因素決定)。

2、按照實驗需要，進行培養(yǎng)并給予0-10ul特定的藥物刺激，處理一段適當?shù)臅r間(例如: 6,12, 24或48小時)。

3、每孔加入10ul CCK-8溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200ul，則需加入20ul CCK-8溶液，以此類推?？梢杂眉酉鄳考毎囵B(yǎng)基和CCK-8但不加細胞的孔作為空白對照，若擔心所使用的藥物會干擾檢測，需設置加相應量細胞培養(yǎng)液、藥物和CCK-8溶液但不加細胞的孔作為空白對照。

4、在細胞培養(yǎng)箱內繼續(xù)孵育1-4小時，具體時間可以通過預實驗確定。預實驗時可以在0.5、1、2和4小時后分別用酶標儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續(xù)實驗。

5、用酶標儀測定在450 nm處的吸光值，若無450nm濾光片，可以使用420-480nm的濾光片。如果樣品為高渾濁度的細胞懸液，可以使用大于600nm的波長，例如650nm，作為參考波長進行雙波長測定。

6、如果需要暫時不測定O.D值，可以向每孔中加入10ul 0.1M HCl溶液或者1% w/v的SDS溶液，避光保存在室溫，24小時內吸光度不會發(fā)生變化。

注意事項：

1、使用96 孔板進行檢測時，如果細胞培養(yǎng)時間較長，請注意蒸發(fā)問題。可將96 孔板外圍一圈加培養(yǎng)基、水或PBS 保濕。同時，可以把96 孔板置于培養(yǎng)箱內靠近水盤的位置以緩解蒸發(fā)。

2、培養(yǎng)時間根據(jù)細胞種類的不同和每孔內細胞數(shù)量的多少而不同。在正式實驗前，建議先做預實驗摸索鋪板的細胞數(shù)量以及加入CCK-8 試劑后的培養(yǎng)時間。

3、鋪板時請注意保證每個孔細胞數(shù)量均勻，建議鋪板過程中注意時?；靹?，防止因細胞沉淀造成不均勻。加入CCK-8 后請前后左右輕輕晃動培養(yǎng)板數(shù)次，使培養(yǎng)基和CCK-8 溶液充分混勻。

4、本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應，如果待測物質有氧化性或還原性，可在加CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)基，去掉藥物的影響。若藥物影響比較小的情況可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。

5、加入CCK-8 時，如果細胞培養(yǎng)時間較長，培養(yǎng)基顏色或pH 值已變化，建議換用新鮮的培養(yǎng)基。

6、用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡，否則會干擾測定。

7、本試劑盒系無菌灌裝生產。在使用過程中，請在生物安全柜內無菌操作，避免污染。

8、為了您的健康和安全，請穿著實驗服并戴一次性手套或乳膠手套操作。

保存方法：

長期保存建議-20℃保存，可保存2年，但不能反復凍融。

 4℃條件下可保存一年。