| 一、細胞基本屬性 | |
| 細胞名稱 | 昆蟲細胞 |
| 細胞別稱 | Hi-five |
| 細胞貨號 | SNL-191 |
| 細胞種屬 | 粉紋夜蛾 |
| 生長情況 | 半貼壁 |
| 培養(yǎng)條件 | Grace’s Insect Medium+10%FBS+1%雙抗 |
| 培養(yǎng)環(huán)境 | air, 100%；28℃ |
| 二、細胞培養(yǎng)操作 | |
| 換液周期 | 2-3天 |
| 培養(yǎng)基體積 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 傳代比例 | 1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定） |
| 傳代方法 | 1.輕輕吸走培養(yǎng)上清，留2-3ml培養(yǎng)基輕輕吹打細胞面吹下細胞； 2.混勻細胞，收集細胞培養(yǎng)基，900rpm離心3-5min，棄上清； 3.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里； 4.補足*培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)； |
| 注意事項 | 半貼壁細胞會附著瓶底，但貼壁不緊，輕輕吸取培養(yǎng)基輕輕吹打細胞面就會脫落，不需要胰酶消化。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng)，更適合吹打細胞操作，吹打細胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。 |
| 三、細胞凍存操作 | |
| 凍存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手tui'薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手tui薦); |
| 凍存規(guī)格 | 200-300萬/ml，1ml每管 |
| 凍存方法 | 1.離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞； 2.將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管； 3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存 |
| 注意事項 | 凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案 |
Tips：
1.細胞半貼壁圓形或多角形生長，部分懸浮圓形，傳代時均可收集培養(yǎng)，換液時將懸浮細胞離心收集后重新接回原瓶，若貼壁細胞較多活性較好時可以不要懸浮的細胞；
2.該細胞對胰酶比較敏感，胰酶消化后細胞形態(tài)會更多梭形，貼壁變緊，傳代不建議使用胰酶消化該細胞；
3.該細胞28度培養(yǎng)，建議27.5-28度之間，超過28度細胞狀態(tài)會受損無法恢復(fù)，低于27度細胞生長速度會變慢，但恢復(fù)溫度后可以恢復(fù)生長。
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