一、細胞基本屬性 | |
細胞名稱 | 小鼠正常肝細胞 |
細胞別稱 | NCTC clone 1469; NCTC1469 |
細胞貨號 | SNL-205 |
細胞種屬 | 小鼠 |
生長情況 | 貼壁 |
培養(yǎng)條件 | H-DMEM+10%FBS+1%雙抗 |
培養(yǎng)環(huán)境 | air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% |
二、細胞培養(yǎng)操作 | |
換液周期 | 2-3天 |
培養(yǎng)基體積 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
傳代比例 | 1:2-1:4(具體情況視細胞生長速度及密度決定) |
傳代方法 | 1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基; 2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s,吸走潤洗的PBS; 3.T25瓶加1ml左右胰酶,輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細胞層; 4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化; 5.消化到細胞間隙變大,但未*脫落時加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰酶消化; 6.混勻細胞,900rpm離心3-5min,棄上清; 7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細胞,均勻分到新的培養(yǎng)瓶里; 8.補足*培養(yǎng)基,將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng); |
注意事項 | 不同品牌胰酶消化時間差別較大,注意嚴格控制消化時間 消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔,不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。 |
三、細胞凍存操作 | |
凍存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手*)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手*); |
凍存規(guī)格 | 200-300萬/ml,1ml每管 |
凍存方法 | 1.消化并離心獲得細胞沉淀后,加配置好的凍存液輕輕重懸細胞; 2.將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管; 3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒,放入-80度冰箱過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;沒有程序凍存盒的實驗室,加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存 |
注意事項 | 凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性,若有異常,及時調(diào)整實驗方案 |
我們*使用尚恩生物NCTC1469(小鼠正常肝細胞)鉆用*培養(yǎng)基(產(chǎn)品貨號:SNLM-205)作為體外培養(yǎng)NCTC1469(小鼠正常肝細胞)的培養(yǎng)基。
SNL-138 | |
細胞種屬 | 人 |
生長情況 | 貼壁 |
培養(yǎng)條件 | 1640+10%FBS+1%雙抗 |
培養(yǎng)環(huán)境 | air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% |
二、細胞培養(yǎng)操作 | |
換液周期 | 2-3天 |
培養(yǎng)基體積 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
傳代比例 | 1:2-1:4(具體情況視細胞生長速度及密度決定) |
傳代方法 | 1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基; 2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s,吸走潤洗的PBS; 3.T25瓶加1ml左右胰酶,輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細胞層; 4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化; 5.消化到細胞間隙變大,但未*脫落時加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰酶消化; 6.混勻細胞,900rpm離心3-5min,棄上清; 7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細胞,均勻分到新的培養(yǎng)瓶里; 8.補足*培養(yǎng)基,將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng); |
注意事項 | 不同品牌胰酶消化時間差別較大,注意嚴格控制消化時間 消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔,不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。 |
三、細胞凍存操作 | |
凍存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手*)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手*); |
凍存規(guī)格 | 200-300萬/ml,1ml每管 |
凍存方法 | 1.消化并離心獲得細胞沉淀后,加配置好的凍存液輕輕重懸細胞; 2.將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管; 3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒,放入-80度冰箱過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;沒有程序凍存盒的實驗室,加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存 |
注意事項 | 凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性,若有異常,及時調(diào)整實驗方案 |
我們*使用尚恩生物QSG7701(人肝細胞)鉆用*培養(yǎng)基(產(chǎn)品貨號:SNLM-138)作為體外培養(yǎng)QSG7701(人肝細胞)的培養(yǎng)基。