一、細(xì)胞基本屬性 | |
細(xì)胞名稱 | 人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞 |
細(xì)胞簡稱 | RAMOS |
細(xì)胞貨號(hào) | SNL-201 |
細(xì)胞種屬 | 人 |
生長情況 | 懸浮 |
培養(yǎng)條件 | 1640+10%FBS+1%雙抗 |
培養(yǎng)環(huán)境 | air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% |
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | |
換液周期 | 2-3天 |
培養(yǎng)基體積 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
傳代比例 | 1:2-1:4(具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定) |
傳代方法 | 1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基; 2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細(xì)胞10-20s,吸走潤洗的PBS; 3.T25瓶加1ml左右胰酶,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細(xì)胞層; 4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化; 5.消化到細(xì)胞間隙變大,但未*脫落時(shí)加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰酶消化; 6.混勻細(xì)胞,900rpm離心3-5min,棄上清; 7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞,均勻分到新的培養(yǎng)瓶里; 8.補(bǔ)足*培養(yǎng)基,將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng); |
注意事項(xiàng) | 不同品牌胰酶消化時(shí)間差別較大,注意嚴(yán)格控制消化時(shí)間 消化傳代細(xì)胞時(shí)吹打細(xì)胞注意盡量輕柔,不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。 |
三、細(xì)胞凍存操作 | |
凍存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手*)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手*); |
凍存規(guī)格 | 200-300萬/ml,1ml每管 |
凍存方法 | 1.消化并離心獲得細(xì)胞沉淀后,加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞; 2.將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管; 3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒,放入-80度冰箱過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;沒有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室,加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存 |
注意事項(xiàng) | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性,若有異常,及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案 |
Tips:
1.細(xì)胞有少部分聚團(tuán)是正?,F(xiàn)象,傳代吹散即可。
我們*使用尚恩生物RAMOS(人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞)鉆用*培養(yǎng)基(產(chǎn)品貨號(hào):SNLM-201)作為體外培養(yǎng)RAMOS(人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞)的培養(yǎng)基。