一、細胞基本屬性 | |
細胞名稱 | 昆蟲卵巢細胞 |
細胞別稱 | SF9; sf9; SF-9; Sf-9; sf-9; Sf 9; Spodoptera frugiperda clone 9; Sf clone 9; IPLB-Sf-9AE; IPLB-SF-9AE; IPLB-SF-9; IPLB-Sf-9; IPLB-Sf9 |
細胞貨號 | SNL-170 |
細胞種屬 | 草地貪夜蛾 |
生長情況 | 半貼壁 |
培養(yǎng)條件 | Grace’s Insect Medium+10%FBS+1%雙抗 |
培養(yǎng)環(huán)境 | air, *;28℃ |
二、細胞培養(yǎng)操作 | |
換液周期 | 2-3天 |
培養(yǎng)基體積 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
傳代比例 | 1:2-1:4(具體情況視細胞生長速度及密度決定) |
傳代方法 | 1.輕輕吸走培養(yǎng)上清,留2-3ml培養(yǎng)基輕輕吹打細胞面吹下細胞; 2.混勻細胞,收集細胞培養(yǎng)基,900rpm離心3-5min,棄上清; 3.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細胞,均勻分到新的培養(yǎng)瓶里; 4.補足*培養(yǎng)基,將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng); |
注意事項 | 半貼壁細胞會附著瓶底,但貼壁不緊,輕輕吸取培養(yǎng)基輕輕吹打細胞面就會脫落,不需要胰酶消化。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng),更適合吹打細胞操作,吹打細胞注意盡量輕柔,不要產生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。 |
三、細胞凍存操作 | |
凍存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手*)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手*); |
凍存規(guī)格 | 200-300萬/ml,1ml每管 |
凍存方法 | 1.離心獲得細胞沉淀后,加配置好的凍存液輕輕重懸細胞; 2.將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管; 3.將凍存管轉入程序凍存盒,放入-80度冰箱過夜,第二天轉入液氮保存;沒有程序凍存盒的實驗室,加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,再-20度靜置2h后轉入-80度過夜,第二天轉入液氮保存 |
注意事項 | 凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性,若有異常,及時調整實驗方案 |
Tips:
1.細胞半貼壁圓形或多角形生長,部分懸浮圓形,傳代時均可收集培養(yǎng),換液時將懸浮細胞離心收集后重新接回原瓶,若貼壁細胞較多活性較好時可以不要懸浮的細胞;
2.該細胞對胰酶比較敏感,胰酶消化后細胞形態(tài)會更多梭形,貼壁變緊,傳代不建議使用胰酶消化該細胞;
3.該細胞28度培養(yǎng),建議27.5-28度之間,超過28度細胞狀態(tài)會受損無法恢復,低于27度細胞生長速度會變慢,但恢復溫度后可以恢復生長。
我們*使用尚恩生物SF9(昆蟲卵巢細胞)zuan用*培養(yǎng)基(產品貨號:SNLM-170)作為體外培養(yǎng)SF9(昆蟲卵巢細胞)的培養(yǎng)基。