利用斑馬魚模型評價結(jié)腸炎防治作用【評價原理】
斑馬魚消化道的解剖結(jié)構(gòu)和細(xì)胞結(jié)構(gòu)與人類消化道相似，具有同心圓層的內(nèi)上皮、結(jié)締組織、環(huán)狀肌肉和外縱肌層。三硝基苯磺酸（TNBS）的乙醇溶液造模法屬于正常免疫系統(tǒng)下的半抗原誘導(dǎo)性模型，當(dāng)TNBS的乙醇溶液灌腸時，乙醇作為有機(jī)溶劑溶解腸粘膜表面的黏液，暫時性破壞腸粘膜屏障，使TNBS和腸組織蛋白結(jié)合形成*抗原，導(dǎo)致腸黏膜免疫系統(tǒng)針對該抗原的遲發(fā)反應(yīng)，并造成腸黏膜的損傷。杯狀細(xì)胞是黏蛋白的主要來源，其數(shù)量和形態(tài)反應(yīng)腸粘膜的健康狀況，是腸粘膜異常的敏感指標(biāo)。
由于斑馬魚通體透明的特點(diǎn)，有兩種方法檢測結(jié)腸炎的防治作用。1.觀察腸腔面積的變化，2. 通過特異性染料（呈藍(lán)色）對腸道的杯狀細(xì)胞染色，通過觀察杯狀細(xì)胞數(shù)量來判斷腸粘膜的損傷情況。
利用斑馬魚模型評價結(jié)腸炎防治作用【實(shí)驗(yàn)方案】
我們將受測試斑馬魚分成三組，分別是正常對照組、模型對照組和抗結(jié)腸炎藥物組。其中正常對照組未攝入TNBS，模型對照組與抗結(jié)腸炎藥物組都加入了等量的TNBS（TNBS通過溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內(nèi)）?？菇Y(jié)腸炎藥物組在攝入TNBS的同時攝入潑尼松之類抗結(jié)腸炎藥物。
服用一段時間抗結(jié)腸炎藥物組后，我們觀察斑馬魚的腸腔面積變化、杯狀細(xì)胞數(shù)量。
【結(jié)果展示】
圖1. 斑馬魚腸腔面積表型圖
綠色虛線區(qū)域?yàn)榘唏R魚腸腔
可以看到，服用抗結(jié)腸炎藥物的腸腔面積與未加TNBS的正常對照組比較相似，沒有明顯的腸腔面積擴(kuò)大。
圖2. 斑馬魚腸道杯狀細(xì)胞表圖
紅色框線區(qū)域內(nèi)藍(lán)色顆粒為杯狀細(xì)胞
可以看到，服用抗結(jié)腸炎藥物的腸道杯狀細(xì)胞數(shù)量與未加TNBS的正常對照組比較相似，沒有像模型組明顯的杯狀細(xì)胞減少情況。
【評價結(jié)論】
1.經(jīng)過每組30尾斑馬魚的對比實(shí)驗(yàn)，服用抗結(jié)腸炎藥物的腸腔面積和杯狀細(xì)胞數(shù)量與未加入TNBS的正常對照組相似，并未出現(xiàn)模型對照組的腸腔變大和杯狀細(xì)胞減少的情況。
2.本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了潑尼松具有結(jié)腸炎的防治作用。
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