HEPES中文全稱4-羥乙基哌-嗪乙磺酸,CAS為7365-45-9,HEPES常用于生物緩沖劑,pH值緩沖范圍:6.8-8.2,hepes緩沖液的主要成分是羥乙基-嗪乙硫磺酸,HEPES是一種兩性緩沖液,溶于水,不與金屬離子形成穩(wěn)定的配合物,其在pH7.2-7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力。多用在生化診斷試劑盒、DNA/RNA 提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。
應(yīng)用于多種生物化學(xué)反應(yīng):
1、 HEPES常用于各種類型生物體的細(xì)胞培養(yǎng)基中用作緩沖試劑, 細(xì)胞-細(xì)胞黏附,細(xì)胞短期聚集培養(yǎng),清洗組織、細(xì)胞所用緩沖液;
2、 在蛋白質(zhì)研究中,PIPES 常用作陽離子交換色譜法中結(jié)合緩沖液的組分和洗脫液;
3、 在DNA研究中,PIPES用作磷酸鈣和DNA沉淀物形成體系的緩沖液,AFM以及電穿孔實(shí)驗(yàn)中的緩沖液。
4、 另外,HEPES對(duì)DNA和限制酶之間的反應(yīng)有一定干擾,也不適合用于Lowry氏法測(cè)定蛋白質(zhì)含量。
5、 HEPES 緩沖液常用于細(xì)胞器和極易變性的、對(duì)pH敏感的蛋白質(zhì)和酶的研究工作,以及生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。
6、 分離與分析RNA核組分的反應(yīng)緩沖液、預(yù)雜交緩沖液、雜交緩沖液;用于RNA與T4RNA。分子生物學(xué)級(jí)用于用T4RNA連接酶進(jìn)行RNA3'-末端標(biāo)記,分離與分析核RNA之反應(yīng)緩沖液組分、預(yù)雜交緩沖液緩和雜交緩沖液成分。
HEPES相關(guān)問題
1. 大多數(shù)細(xì)胞所需pH在7.2-7.4,但細(xì)胞培養(yǎng)合適pH值隨培養(yǎng)的細(xì)胞種類不同而不同,成纖維細(xì)胞喜歡較高pH(7.4-7.7),而傳代轉(zhuǎn)化細(xì)胞系則需要偏酸pH (7.0-7.4),由于多數(shù)培養(yǎng)液靠碳酸氫鈉(NaHCO3)與CO2體系進(jìn)行緩沖,氣相中的CO2濃度應(yīng)與培養(yǎng)液中碳酸氫鈉濃度相平衡。如果氣相或培養(yǎng)箱空氣中CO2濃度設(shè)定在5%培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為1.97g/L;如果CO2濃度維持在10%培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為3.95g/L。細(xì)胞培養(yǎng)瓶蓋不
應(yīng)擰得太緊,以保證氣體交換;
利用HCO3和CO2緩沖對(duì)的培養(yǎng)液pH值不穩(wěn)定,儲(chǔ)存一定時(shí)間后容易偏堿。如果培養(yǎng)液的PH變化太快,就可以在培養(yǎng)液中加HEPES緩沖液至10---25mM的終濃度;
3. HEPES是一種兩性緩沖液,大多用于氧化磷酸化、無菌環(huán)境的蛋白質(zhì)合成、光合磷酸化、CO2固定等生物學(xué)研究中;HEPES對(duì)金屬離子酶作用底物無影響,適用于透射電子顯微技術(shù)(TEM)中;在細(xì)胞培養(yǎng)基中,優(yōu)點(diǎn)是在開放式培養(yǎng)或細(xì)胞觀察時(shí)能維持較恒定的PH值,HEPES(25mM)可以作為碳酸氫鹽緩沖液的替代品,或作為碳酸氫鹽緩沖液的添加物(10-15mM),以解除需要高濃度CO2培養(yǎng)環(huán)境的限制,溶解的CO2與碳酸氫鹽對(duì)良好的細(xì)胞生長也是很重要的