新城疫病毒抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑檢驗(yàn)方法

新城疫病毒抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑檢驗(yàn)方法

廣州健侖生物科技有限公司

【產(chǎn)品名稱】
　　通用名稱：新城疫病毒抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑檢驗(yàn)方法

英文名稱：Newcastle disease virus Antibody Test Kit  (ELISA)

【包裝規(guī)格】48份/盒、96份/盒

【預(yù)期用途】雞新城疫是由新城疫病毒(Newcastle disease virus ,NDV)引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。本病主要特征是呼吸困難、嚴(yán)重下痢、粘膜和漿膜出血，病程稍長(zhǎng)的伴有神經(jīng)癥狀。雞感染后，體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生特異性抗體。檢測(cè)抗新城疫病毒抗體可作為該病疫苗免疫狀況及該病輔助檢測(cè)指標(biāo)。本試劑盒采用ELISA方法檢測(cè)雞血清中的特異性抗新城疫病毒抗體。本試劑靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，操作方便快速，可分多次使用。

【主要組成成份】

【儲(chǔ)存條件及有效期】

• 2~8℃避光保存，防止冷凍，有效期為12個(gè)月。
• 包被板開(kāi)封后2~8℃避光保存，使用期限為15天。

【適用儀器】

含450nm和630nm波長(zhǎng)酶標(biāo)儀；37℃恒溫設(shè)備；可調(diào)微量移液器。

【樣本要求】

• 為取得佳實(shí)驗(yàn)效果，避免使用含疊氮鈉、高血脂、長(zhǎng)菌以及嚴(yán)重溶血的樣品；
• 短期（7天）將進(jìn)行檢測(cè)的血清樣品可存放于2～8℃；如需長(zhǎng)期保存，應(yīng)置于-20℃或以下，避免反復(fù)凍融。

【檢驗(yàn)方法】

• 洗滌液配制：用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液（2號(hào)液）按1：10稀釋（如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水），充分混勻即為工作洗滌液。
• 樣本稀釋：用樣本稀釋液（5號(hào)液）將待檢血清按1:100稀釋（如5μl血清＋495μl樣本稀釋液），充分混勻。 陰性、陽(yáng)性對(duì)照品不用稀釋，直接加樣。
• 加樣反應(yīng)：每次試驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性及空白對(duì)照各1孔（分別加入陰性、陽(yáng)性對(duì)照及樣本稀釋液100μl）。樣本檢測(cè)孔每孔加已稀釋血清樣本100μl。37℃避光反應(yīng)30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，每孔注滿工作濃度洗滌液洗滌3次，每次均需停留1分鐘；zui后一次甩凈，拍干。
• 加酶反應(yīng)：除空白對(duì)照孔外，其余每孔加酶結(jié)合物（1號(hào)液）1滴，37℃避光反應(yīng)30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，如上洗滌，拍干。
• 顯色反應(yīng)：加底物（3號(hào)液）和顯色劑（4號(hào)液）各1滴，混勻，37℃下避光顯色10分鐘。
• 加終止液（6號(hào)液）1滴，以空白對(duì)照調(diào)零，用酶標(biāo)儀于450nm波長(zhǎng)（630nm作為參比波長(zhǎng)）讀取OD值。
•  

• 【參考值】

• Cut-off 值 (COV)=陰性對(duì)照平均OD值×2.1 (陰性對(duì)照孔OD值＜0.08時(shí)按0.08計(jì))。
• 有效性判定：

• 空白對(duì)照孔OD值＜0.05（若大于0.05則實(shí)驗(yàn)無(wú)效）；

  陰性對(duì)照孔OD值≤0.10（若大于0.10則實(shí)驗(yàn)無(wú)效）；

  陽(yáng)性對(duì)照孔OD值≥0.3（若小于0.3則實(shí)驗(yàn)無(wú)效）。

  【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

  樣本OD值≥COV值時(shí)，判為新城疫病毒抗體陽(yáng)性，

  樣本OD值＜COV值時(shí)，判為新城疫病毒抗體陰性。                         

  【檢驗(yàn)方法的局限性】本試劑僅適用檢測(cè)雞血清。

  【注意事項(xiàng)】

• 包被板須密封防潮。從冷藏環(huán)境中取出時(shí)，應(yīng)平衡至室溫后，方可開(kāi)封啟用。未使用完的板條應(yīng)即時(shí)放回有干燥劑的自封袋中，4℃密封保存。
• 滴加試劑前應(yīng)將滴瓶輕搖、混勻，首滴棄去；滴加試劑時(shí)瓶身應(yīng)保持豎直。
• 瓶蓋每次使用后要蓋緊，各瓶蓋之間不可混用。不同批號(hào)試劑盒的試劑組份不可混用。
• 孵育時(shí)，推薦使用水浴箱。如無(wú)水浴箱，可取密封濕盒放入37℃溫箱內(nèi)使用。
• 用棄的試劑盒及樣本都應(yīng)按污染物妥善處理。試劑盒內(nèi)終止液有腐蝕性，須小心使用。

健侖生物有以下檢測(cè)試劑：

新城疫病毒為副黏病毒科新城疫樣病毒屬（Avulavirus）的禽副黏病毒I型（APMV一1）。病毒存在于病禽的所有組織器官、體液、分泌物和排泄中，以腦、脾、肺含毒量zui高，以骨髓含毒時(shí)間zui長(zhǎng)。在低溫條件下抵抗力強(qiáng)，在4℃可存活1～2年，一20℃時(shí)能存活10年以上；真空凍干病毒在30"C可保存30天，15℃可保存230天；不同毒株對(duì)熱的穩(wěn)定性有較大的差異。
該病毒對(duì)消毒劑、日光及高溫抵抗力不強(qiáng)，一般消毒劑的常用濃度即可很快將其殺滅，很多種因素都能影響消毒劑的效果，如病毒的數(shù)量、毒株的種類、溫度、濕度、陽(yáng)光照射、貯存條件及是否存在有機(jī)物等，尤其是以有機(jī)物的存在和低溫的影響作用zui大。