T2毒素檢測(cè)試劑盒

T2毒素檢測(cè)試劑盒

使用說(shuō)明書

（酶聯(lián)免疫法）

 1 原理及用途

T2毒素檢測(cè)試劑盒采用一步競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)玉米、大米、豆類、花生、燕麥、飼料等樣本中的T2毒素，試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí)，酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被T2毒素抗原與樣本中T2毒素競(jìng)爭(zhēng)抗T2毒素抗體(抗體工作液)，同時(shí)抗T2毒素抗體與酶標(biāo)二抗（酶標(biāo)記物）相結(jié)合，經(jīng)TMB底物顯色，樣本吸光值與其含有的T2毒素成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中T2毒素的含量。

2 技術(shù)指標(biāo)

2.1 T2毒素檢測(cè)試劑盒靈敏度：0.05ppb(ng/ml)

2.2 反應(yīng)模式：25℃，30min～15min

2.3 檢測(cè)下限：

花生、玉米、燕麥、大豆、飼料等 6ppb

3 T2毒素檢測(cè)試劑盒組成

酶標(biāo)板 96孔

濃縮標(biāo)準(zhǔn)液6瓶

酶標(biāo)記物 1瓶

抗體工作液1瓶

底物液A 1瓶

底物液B 1瓶

終止液1瓶

濃縮洗滌液1瓶

說(shuō)明書 1份

蓋板膜 1份

自封袋 1份

4 需要的器材和試劑

4.1 儀器：酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）、漏斗、濾紙

4.2 微量移液器：?jiǎn)蔚?0µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl

4.3 試劑：甲醇、去離子水

5 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟

    將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

5.1 編    號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

5.2 加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩5秒混勻，25℃反應(yīng)30分鐘。

5.3 洗    滌：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次，每次間隔30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

5.4 顯    色：每孔加入底物液A 50µl，再加底物液B 50µl，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘（若藍(lán)色過(guò)淺，可適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間）。

5.5 終    止：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。

5.6 測(cè)吸光值：用酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm）。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。

6 結(jié)果分析

6.1 百分吸光率的計(jì)算

    標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液（0ppb）的吸光度值，再乘以*，即

A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

6.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

    以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度（ppb）的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測(cè)物的實(shí)際濃度。

    若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（索?。?/span>

7 貯藏及保存期

儲(chǔ)藏條件：T2毒素檢測(cè)試劑盒于2-8℃保存，避免冷凍。

保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見包裝盒。