人參中總皂甙的超聲波快速提取方法研究

      長期以來，在人參總甙的測定方法中，總皂甙的提取過程一直是決定方法快慢的關鍵步驟。常用的提取方法有索氏提取法和超聲波提取法。索氏法是經典的提取方法，應用范圍較廣，提取比較*；缺點是提取時間長，操作繁瑣，約需2個工作日。超聲波提取法大大縮短了提取時間，只需約1個工作日，提高了工作效率。本法采用甲醇作提取劑。研究了超聲波提取的各種影響因素，建立了人參中總皂甙的半微量快速提取方法，將單一樣品的分析時間進一步縮短為約lh，大大提高了分析速度及工作效率，節(jié)省試劑，降低了實驗室勞動強度。與索氏提取法對照分析表明，本法不僅快速，而且也比較準確，對樣品的提取和測定*符合一般測試要求。

1 試驗部分

1．1 主要儀器與試劑

760MC雙光束紫外分光光度計,超聲波發(fā)生器，工作頻率40kHz。香草醛一冰乙酸溶液：80g·L 人參皂甙（Re）標準品：純度≥98 （吉林省藥品檢驗所提供）人參皂甙標準溶液：lmg·ml ，稱取人參皂甙標準品5．Qmg，用甲醇溶解并定容至5ml。其他試劑均為分析純，水為一次蒸餾水。

1．2 樣品中總皂甙的提取

稱取供試樣品約0．1OOg[粒度應通過60號篩（孔徑0．25mm）]于10ml具塞試管中，準確加入甲醇2ml，加塞后放人超聲波水浴中超聲30min。然后取出試管置離心機中以1500r·min 離心15min，取出，備用。

1．3 樣品測定

移取上清液50 l于10ml具塞試管中，放入水浴中揮干溶劑。取出后再依次加入香草醛一冰乙酸溶液0．2ml，高氯酸0．8ml，搖勻 置于60℃水浴中加熱l5min。取出后于冷水中冷卻至室溫，再加入冰乙酸5ml，搖勻，于560nm 波長處測定吸光度，與人參中總皂甙的超聲波快速提取方法研究標準對照，計算樣品中總皂甙含量。

2 結果與討論

2．1 取樣量對超聲提取效果的影響

與所有的聲波一樣，超聲波在不均勻的介質中傳播也會發(fā)生散射衰減。在對樣品進行超聲提取時，樣品整體作為一種介質是各向異性的，即在各個方向上都不均勻，造成超聲波的散射，因此，到達樣品內部的超聲能量會有一定程度的衰減，影響提取效果。由于本法采用10ml具塞試管作為樣品提取時的容器，其截面積較小，當取樣量大時，則樣品厚度增大，到達樣品內部的超聲能量衰減也就越嚴重，提取效果越差。綜合以上試驗結果及其他因素，本法選擇取樣量為0．1g左右。

2．2 供試樣品的細度對提取效果的影響

超聲波不僅在兩種介質的界面處發(fā)生反射和折射，而且在較粗糙的界面上還發(fā)生散射，引起能量的衰減_5]。在本法中，供試樣品的細度將直接影響作用于樣品中的超聲波能量的大小。資料表明，當顆粒直徑與超聲波長的比值為l ～lO 時，這種散射很??；當比值大于lO 時，散射逐漸增大，造成能量大幅度衰減l53。本法所用超聲波發(fā)生器工作頻率為40kHz，經計算得知，當供試樣品的細度為6O目時，其顆粒直徑與超聲波長的比值大約為1 ，此時提取效果較好；當細度小于6O目時，提取效果下降。此外，在較大的顆粒內部，溶劑的浸提作用也會明顯減弱，這也是供試樣品細度對提取效果產生影響的另一個重要原因。

2．3 提取時間的選擇

通過對4個不同的人參樣品，采用不同的提取時間來進行超聲提取，結果表明，當超聲提取時間達到30min時，即可達到較好的提取效果。

2．4 超聲提取液直接顯色及與標準品的光譜對照

文獻中不論索氏提取法還是超聲波提取法（采用正丁醇作提取劑），都要經過脫脂處理。本法采用甲醇作提取劑，由于甲醇的極性要高于正丁醇，脂類在甲醇中的溶解度要小于在正丁醇中的溶解度，并且本法取樣量僅為0．1g（索氏提取法約2g，文獻超聲波法為1．0g），基體干擾水平低?？刹扇〖状汲曁崛〔㈦x心后，直接吸取甲醇溶液進行顯色測定，省去脫脂步驟，簡化了試驗操作，進一步縮短了檢驗時間。與索氏提取法并經脫脂處理的樣品吸收光譜相對比，其形狀相似，zui大吸收峰位置相同，同時也與標準品顯色后的吸收光譜作了對比，結果表明本法省略了脫脂步驟是基本可行的。

2．5 方法對照試驗

分別采用索氏提取法和超聲波提取法（本法）進行人參總皂甙的9次平行測定試驗，并將測定結果進行統(tǒng)計分析比較。結果表明，經t檢驗和F檢驗，兩種方法之間無顯著性差異。

2．6 綜合提取效率比較

本法采用超聲波提取法進行人參總皂甙測定，所用提取劑的量和樣品量僅為索氏提取法的幾十分之一，而單樣分析速度則快十幾倍左右；即使與文獻超聲波提取法相比，在分析速度和節(jié)省試劑方面也有較明顯的優(yōu)勢，并且在進行成批樣品分析時具有更大的*性。