隨著GSK的RSV疫苗獲得FDA批準上市,2023年即將成為RSV疫苗商業(yè)化元年。而RSV作為一種具有高度傳染性的病毒,可導(dǎo)致所有年齡段個體的肺部和呼吸道感染,尤其對老人和嬰兒特別危險。雖然RSV引起的感染具有自限性,但對于免疫力低下的兒童和老年人會發(fā)展為嚴重的呼吸道感染,因此RSV疫苗接種對象主要為嬰幼兒和老年人。根據(jù)行業(yè)預(yù)測,2024-2028年,RSV疫苗和抗體市場將以38.9%的年復(fù)合增長率增長,到2028年市場將達到95.3億美元,其中疫苗市場將占據(jù)大部分市場份額(67.5%)。
目前全球在研的RSV疫苗有近70種,研究企業(yè)除葛蘭素史克(GSK)外,還有輝瑞、楊森、賽諾菲、阿斯利康、默沙東等。目前已布局RSV疫苗研發(fā)的企業(yè)有8家,其中有5款相關(guān)產(chǎn)品已進入臨床研究階段。國內(nèi)的布局者也眾多,包括艾棣維欣、嘉晨西海、艾美疫苗、三葉草、百克生物、智飛生物、藍鵲生物/沃森生物等。
國際上RSV 疫苗研發(fā)進展(參考第三方總結(jié))
現(xiàn)階段RSV疫苗的研發(fā)主要集中在四大類疫苗,包括減毒活疫苗、病毒載體疫苗、重組亞單位(顆粒)疫苗和核酸疫苗。本文總結(jié)了四種類型的RSV疫苗的工藝方案,其中重組亞單位疫苗的研發(fā)則集中在糖蛋白F上。RSV的表面蛋白G和F在吸附和融合過程中發(fā)揮重要作用,糖蛋白G可使RSV附著在宿主細胞上,糖蛋白F可促進其進入細胞并導(dǎo)致形成合胞體。由于G蛋白的高度變異性,F(xiàn)蛋白成為疫苗開發(fā)的主要抗原。F蛋白有pre-F和post-F兩個構(gòu)象,pre-F極不穩(wěn)定。很多公司會進行蛋白改造,增加蛋白穩(wěn)定性。
RSV 減毒活疫苗工藝
以賽諾菲研發(fā)的RSV減毒疫苗為例,工藝流程為細胞培養(yǎng),進行細胞擴增;病毒感染細胞,進行病毒擴增;收獲含病毒料液進行核酸酶處理;澄清過濾;層析可以使用百林科的復(fù)合模式填料MaXtar COLL 700進行純化,去除宿主蛋白及宿主核酸,復(fù)合模式填料MaXtar COLL 700的上樣量相對于分子篩填料有很大優(yōu)勢;層析流穿液使用中空纖維膜進行濃縮換液;進行除菌過濾。
RSV 重組蛋白疫苗工藝
以葛蘭素史克的CHO細胞表達的重組RSV疫苗為例,工藝流程為細胞培養(yǎng);澄清過濾,使用深層過濾去除細胞碎片等雜質(zhì),使用0.2 µm過濾器過濾以降低微生物負荷;澄清后的料液經(jīng)過吐溫80孵育進行病毒滅活;第一步層析為親和填料對病毒滅活后的料液進行捕獲,RSV Pre F蛋白可以與特定的親和填料結(jié)合,宿主蛋白流穿,蛋白得到提純并起到濃縮作用;第二步層析為離子交換層析,使用MaXtar Q HR高分辨率陰離子交換填料,結(jié)合洗脫模式去除宿主蛋白、宿主核酸,同時此步驟也是病毒清除的步驟;第三步層析為復(fù)合模式層析,使用MaXtar MMA陰離子與疏水相互作用復(fù)合填料,結(jié)合洗脫模式,該步驟主要用于去除高低分子量的產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)和宿主蛋白,同時具有病毒清除效果;層析后納濾膜過濾,進行病毒去除;最后超濾濃縮換液。
RSV 病毒載體疫苗工藝
以腺病毒載體疫苗為例,病毒生產(chǎn)工藝采用HEK293進行細胞培養(yǎng);病毒感染;病毒感染后可以用表面活性劑對細胞進行裂解、核酸酶進行宿主核酸的降解;裂解液使用深層過濾進行澄清,使用超濾進行濃縮、換液;第一步層析使用后MaXtar Q HR進行捕獲,去除雜蛋白;第二步層析使用MaXtar COLL 700進行精純,流穿模式;層析后料液使用中空纖維進行超濾濃縮換液;除菌過濾得到疫苗原液。
RSV mRNA疫苗工藝
mRNA類疫苗工藝包括了質(zhì)粒模板的制備、mRNA的合成與純化、LNP的制備及無菌灌裝等。質(zhì)粒的制備工藝可以選擇經(jīng)典三步法工藝和改進兩步法工藝:
mRNA的純化工藝一般采用親和層析Oligo DT進行捕獲,還可以選用復(fù)合模式層析填料MaXtar COLL 700/400,此過程可以去除酶類、NTP及模板DNA等工藝相關(guān)雜質(zhì);精純階段可以使用高分辨的疏水填料MaXtar Phenyl HR或離子填料MaXtar Q HR,去除片段或dsRNA等產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)。
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