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來(lái)源:轉(zhuǎn)載
既使日常精心維護(hù)的液相色譜儀,隨著使用時(shí)間的增加或使用者經(jīng)驗(yàn)不足也會(huì)出現(xiàn)一些問(wèn)題或故障?,F(xiàn)將液相色譜儀容易出現(xiàn)的故障及解決辦法介紹如下:
1.保留時(shí)間變化
保留時(shí)間的變化有三中情況:波動(dòng)、縮短、延長(zhǎng)。
保留時(shí)間出現(xiàn)波動(dòng)時(shí),應(yīng)檢查柱溫是否處于恒溫狀態(tài),如果設(shè)置為室溫,氣溫的變化
會(huì)引起保留時(shí)間的波動(dòng),應(yīng)該設(shè)置為恒定溫度;等度和梯度間還沒(méi)有充分達(dá)到平衡狀態(tài)時(shí),應(yīng)該用十倍以上柱體積的流動(dòng)相去平衡色譜柱;緩沖液濃度太低時(shí),應(yīng)換用>25mmol/L的緩沖液;色譜柱被污染或已經(jīng)接近柱壽命時(shí),應(yīng)更換保護(hù)柱或換新色譜柱。
保留時(shí)間縮短時(shí),流速增加,應(yīng)檢查流速的設(shè)定;柱溫高時(shí),應(yīng)檢查柱的設(shè)置;進(jìn)樣量太大時(shí),減少樣品用量或降低樣品濃度;流動(dòng)相的組成發(fā)生了改變,比如流動(dòng)相中易揮發(fā)有機(jī)相蒸發(fā),兩相之間互溶不好,會(huì)導(dǎo)致流動(dòng)相不均勻或某一相出現(xiàn)部分沉淀;流動(dòng)相的PH值應(yīng)保持3~7.5范圍內(nèi),否則會(huì)引起柱鍵合相的流失。
保留時(shí)間延長(zhǎng)時(shí),流速減小,應(yīng)檢查流速的設(shè)定和管路是否有泄露;柱溫低時(shí),檢查
柱溫的設(shè)置;流動(dòng)相的組成發(fā)生了改變,比如流動(dòng)相中易揮發(fā)有機(jī)相蒸發(fā),兩相之間互溶不好,會(huì)導(dǎo)致流動(dòng)相不均勻或某一相出現(xiàn)部分沉淀;檢查流動(dòng)相的pH值是否3~7.5范圍內(nèi),否則會(huì)引起柱鍵合相的流失。
2.峰拖尾
色譜柱超載時(shí),要減少進(jìn)樣量或稀釋樣品或使用高溶量的色譜柱;色譜柱性能不佳時(shí),更換色譜柱;死體積或柱外體積過(guò)大時(shí),將連接降至zui低,并對(duì)所有連接點(diǎn)作合理的調(diào)整,盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接;加入硅羥基,其作用是純化色譜柱,增加緩沖液的濃度,降低流動(dòng)相的pH值,純化樣品;出現(xiàn)峰干擾時(shí),應(yīng)清潔樣品,調(diào)整流動(dòng)相。
3.峰展寬
進(jìn)樣體積過(guò)大時(shí),用流動(dòng)相配樣;樣品過(guò)載時(shí),進(jìn)小濃度、小體積樣品;在進(jìn)樣閥中
造成峰擴(kuò)展時(shí),進(jìn)樣前后排出氣泡,以降低擴(kuò)散;流動(dòng)相粘度過(guò)高時(shí),提高柱溫,并采用低粘度流動(dòng)相;等度洗脫,保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí),要增加流速或改用梯度洗脫;柱外體積過(guò)大時(shí),[1]將連接管徑和連結(jié)管降至zui小。
4.基線噪聲
流動(dòng)相或檢測(cè)器中有氣泡時(shí),要對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行脫氣處理;檢測(cè)器燈有連續(xù)噪聲時(shí),更
換氘燈;出現(xiàn)由污染引起的隨機(jī)噪聲時(shí),應(yīng)清洗色譜柱、凈化樣品、使用HIPLC級(jí)試劑;偶然有噪聲時(shí),可能是來(lái)自電源的干擾,如果電壓不穩(wěn)時(shí),應(yīng)采用穩(wěn)壓電源。
5.肩峰或分叉
進(jìn)樣量太大或樣品濃度過(guò)高時(shí),要減少進(jìn)樣量或稀釋樣品;樣品溶劑太強(qiáng)時(shí),應(yīng)使用軟弱的樣品溶劑;色譜柱性能欠佳時(shí),應(yīng)更換色譜柱。
6鬼峰
色譜柱未達(dá)到平衡時(shí),要繼續(xù)平衡色譜柱;樣品中溶劑出峰時(shí),使用流動(dòng)相作樣品的
溶劑;出現(xiàn)進(jìn)樣閥殘余峰時(shí),使用強(qiáng)溶劑清洗進(jìn)樣閥,并改進(jìn)閥和樣品的清洗程序;流動(dòng)相用水不合格率,應(yīng)使用HPLC級(jí)的水。
使用注意事項(xiàng)
在使用混合溶劑作流動(dòng)相時(shí),一定要先混合,再過(guò)0.45um濾膜;等流動(dòng)相恢復(fù)至室溫,用超聲波或He氣進(jìn)行脫氣處理后,方可使用。
更換流動(dòng)相時(shí),必須按一定的程序進(jìn)行,否則會(huì)產(chǎn)生問(wèn)題。更換流動(dòng)相有三種情況:互溶性流動(dòng)相的更換、無(wú)互溶性流動(dòng)相的更換和緩沖溶液的更換。對(duì)于*種情況,先用準(zhǔn)備更換的流動(dòng)相把吸濾器*清洗干凈,再打開(kāi)儀器的排液閥,按清洗鍵,清洗泵中的流動(dòng)相。
將吸濾器放入新流動(dòng)腥中,減慢流速清洗數(shù)分鐘后關(guān)閉排液閥。接下來(lái)清洗色譜柱和檢測(cè)器檢測(cè)池直到基線平穩(wěn)。對(duì)于第二種情況,先用與新舊流動(dòng)相都互溶的中間清洗液(如:異丙醇)清洗,再用新流動(dòng)相清洗,具體過(guò)程與*種情況相同。對(duì)于第三情況,應(yīng)先用蒸餾水作為中間清洗液進(jìn)行清洗,再用新流動(dòng)相清洗即可。
免責(zé)聲明