如何練就細胞計數(shù)神功?

01 細胞計數(shù)的重要性

對于大多數(shù)需使用細胞系的操作，如轉染、細胞融合技術、冷凍保存和傳代培養(yǎng)等，有必要在操作前對細胞數(shù)進行定量。因為如果接種細胞的密度過高，實驗還沒結束細胞就會出現(xiàn)接觸抑制，影響細胞狀態(tài)，蛋白的表達也會受到影響；但如果密度過低最后收集到的樣品過少，檢測不到，我們要花額外的時間等待細胞長到合適的密度。

使用相同數(shù)量的細胞將保持最佳生長，并有助于使用細胞培養(yǎng)的程序標準化，這反過來也使結果具有更好的再現(xiàn)性。所以細胞計數(shù)非常重要，它是一個實驗成功的基礎。

文章開頭提到的血球計數(shù)板是以往細胞計數(shù)常用的方式，它的使用較為耗時，還易受操作者主觀判斷的影響，并且某些細胞類型，如形成簇的細胞類型，難以用這種方法計數(shù)。

02 Scepter™3.0細胞計數(shù)儀 

現(xiàn)有的細胞計數(shù)設備可提供替代的細胞定量方法，這就包括我們的Scepter™3.0細胞計數(shù)儀。

Scepter™3.0細胞計數(shù)儀采用“計數(shù)金標準”庫爾特原理。

• Scepter感應器吸入精確的樣本體積；

• 細胞穿過感應器小孔時，電阻值增加。電阻值的增加導致電壓的增加；

• 每個細胞經過時引起的電壓的增加作為一個脈沖被記錄下來；

• 用直徑和細胞數(shù)目繪制直方圖，脈沖的大小代表細胞的大小，脈沖的數(shù)目代表細胞的個數(shù)。

最大的特點是：

• 計數(shù)精準，提供基于細胞大小的直方圖（如上圖）；

• 手持式體積小巧；

• 可以給出細胞體積；

• 可以進行復雜的混合型的細胞計數(shù)；

• 計數(shù)迅速，平均在30秒之內完成計數(shù)（最快14秒）。

03 檢測范圍與應用

基于細胞直徑以及樣品濃度的感應器選擇指南：

人體細胞中最小的是血小板，直徑只有約2微米；最大的是成熟的卵細胞，其直徑在200微米左右，鴕鳥卵細胞甚至可以達到長15～22厘米,直徑14至15厘米。細胞的直徑和大小會直接影響覆蓋度百分比，同樣的接種濃度，Cos7和293細胞最終的覆蓋度有著極大的區(qū)別。

讓我們來看看在分離PBMC后和流式直接對比的數(shù)據：

外周血單個核細胞(Peripheral blood mononuclear cell, PBMC)是外周血中具有單個核的細胞，包括淋巴細胞和單核細胞。外周血單個核細胞主要的分離方法是Ficoll-hypaque(聚蔗糖－泛影葡胺)密度梯度離心法。

離心獲得PBMC后分別染色通過流式進行分群(Lymphocyte 和Monocyte)和計數(shù)，ScepterTM3.0的結果和流式在趨勢上具有很好的相關性。

無論是分群還是計數(shù)的回歸系數(shù)都達到了0.98以上。綜上所述，Scepter3.0可以準確對PBMC細胞進行計數(shù)和分群。