一、實驗目的

本研究利用固相萃取作為樣品前處理方法，HPLC作為分析方法，檢測水產(chǎn)品樣品中的喹乙醇的殘留水平。該方法操作簡便，可簡化樣品前處理過程，減少有機溶劑的使用。

二、實驗目標物

喹乙醇（CAS: 23696-28-8）。

三、應用范圍

本方法適用于水產(chǎn)品中喹乙醇的檢測的HPLC檢測及確證。

四、實驗材料

biocomma®Copure® MAX 固相萃取柱60mg/3 mL(Cat. No. COMAX360)。

五、實驗步驟

1、樣品提取

準確稱取5 g勻漿魚肉樣品(精確到0.001 g)于50 mL離心管中，加入35 mL甲醇-水溶液(5:95, v/v)，離心管置入搖床中，室溫下恒溫振蕩器振蕩速度110 r/min，避光振蕩45 min。提取液在3500 r/min下離心10 min，上清液經(jīng)濾紙過濾，濾液加入10 mL正己烷，充分混勻后，以5000 r/min離心10 min，棄去上層溶液，下層溶液待凈化。

2、SPE柱凈化

(1) 活化：MAX 固相萃取柱使用前依次使用3 mL甲醇和3 mL水活化。
(2) 上樣和洗脫：將待凈化的樣品清液加入已活化好的固相萃取柱中，以1 mL/min的流速過柱，棄去濾液。用3mL甲醇-水溶液(5:95, v/v)淋洗固相萃取柱，棄去淋洗液，用吸耳球吹出小柱中殘留液。用5 mL甲酸-乙酸乙酯溶液(1:9, v/v)洗脫固相萃取柱，收集洗脫液。
(3) 重新溶解：洗脫液于40 ℃氮吹吹干，用2 mL甲醇定容，0.22 μm微孔濾膜過濾，供HPLC上機測試。

3、HPLC條件

設(shè)備：Waters Alliance 2695
色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm，5μm )
檢測器：Waters 2487 紫外檢測器
檢測波長：380 nm
流動相：A：甲醇      B：0.1%甲酸水溶液
洗脫方式：梯度洗脫
表1  梯度洗脫條件

流速：1 mL/min
進樣體積：20μL

六、實驗結(jié)果

1、魚肉中喹乙醇2 mg/kg添加回收結(jié)果
表2 魚肉中喹乙醇2 mg/kg添加回收結(jié)果

2、添加水平為2 mg/kg魚肉中喹乙醇檢測色譜圖

圖1  添加水平為2 mg/kg魚肉中喹乙醇檢測色譜圖