一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/h4>

本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為分析方法，檢測(cè)食品中苯甲酸含量。該方法可簡(jiǎn)化樣品的前處理過(guò)程，節(jié)省有機(jī)溶劑的使用，操作簡(jiǎn)便。

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物

苯甲酸 (CAS:65-85-0) 。

三、應(yīng)用范圍

本方法適用于食品中苯甲酸的檢測(cè)的HPLC檢測(cè)及確證。

四、參考標(biāo)準(zhǔn)

《GB/T 23495-2009 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測(cè)定 高效液相色譜法》。

五、實(shí)驗(yàn)材料

biocomma®Copure® MAX 固相萃取柱60mg/3mL(Cat. No. COMAX360)。

六、實(shí)驗(yàn)步驟

1、樣品提取

準(zhǔn)確稱取牛奶10 g于50 mL離心管中，加入0.25 mol/L的溶液2 mL，搖勻，再加入1 mol/L的乙酸鋅溶液2 mL，搖勻，4000 r/min離心10 min。上清液待凈化。

2、SPE柱凈化

(1) 活化：MAX 固相萃取柱使用前用3 mL甲醇、3 mL水活化。
(2) 上樣和洗脫：在MAX固相萃取柱上加入5 mL備用樣液，棄去流出液。用3 mL 2%氨水水溶液（v/v）、3mL甲醇淋洗，棄去淋洗液；抽干小柱；用2 mL 5%甲酸甲醇溶液（v/v）洗脫，收集洗脫液（整個(gè)上樣、洗脫過(guò)程保持流速1 mL/min）。
(3) 重新溶解：洗脫液過(guò)0.45 μm濾膜，上機(jī)測(cè)試。

3、HPLC條件

設(shè)  備：Waters Alliance 2695
色譜柱 ：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm, 5μm)
檢測(cè)器 ：Waters 2487 紫外檢測(cè)器
流動(dòng)相 ：A：乙腈
B：磷酸鹽緩沖溶液（稱取磷酸二氫鉀  2.5g+
2.5g，加水溶解定容到1000mL）
洗脫方式：等度洗脫A:B=10:90
流速：1.0 mL/min
檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm
進(jìn)樣體積:  20 μL

七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1、25 mg/kg牛奶中苯甲酸的添加回收結(jié)果
表1  牛奶中苯甲酸25  mg/kg添加回收結(jié)果

2、添加水平為25 mg/kg牛奶中苯甲酸檢測(cè)的液相色譜圖

圖1  添加水平為25  mg/kg牛奶中苯甲酸檢測(cè)的液相色譜圖