一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/h4>

本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為分析方法，檢測飼料中苯甲酸含量。該方法可簡化樣品的前處理過程，節(jié)省有機(jī)溶劑的使用，操作簡便。

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物

苯甲酸 (CAS:65-85-0) 。

三、應(yīng)用范圍

本方法適用于飼料中苯甲酸的檢測的HPLC檢測及確證。

四、參考標(biāo)準(zhǔn)

《NY/T 2297-2012 飼料中苯甲酸和山梨酸的測定 高效液相色譜法》。

五、實(shí)驗(yàn)材料

biocomma®Copure®  MAX 固相萃取柱60mg/3mL (Cat. No. COMAX360)。

六、實(shí)驗(yàn)步驟

1、樣品提取

準(zhǔn)確稱取飼料樣品2.0 g于50 mL離心管中，加入2% 氨水水溶液（v/v）21 mL，超聲提取10 min，振蕩提取10min，準(zhǔn)確加入0.25 mol/L的溶液2 mL、1 mol/L的乙酸鋅溶液2 mL，渦旋混勻。5000 r/min離心5min，取上清液5 mL轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中,用2% 氨水水溶液（v/v）定容至25 mL，備用。

2、SPE柱凈化

(1) 活化：MAX 固相萃取柱使用前用3 mL甲醇、3mL 水活化。
(2) 上樣和洗脫：在MAX固相萃取柱上加入5 mL備用樣品，棄去流出液；用3 mL 2% 氨水水溶液（v/v）、3mL甲醇淋洗，棄去淋洗液；抽干小柱；用5% 甲酸甲醇溶液（v/v）2 mL洗脫，收集洗脫液（整個(gè)上樣、洗脫過程保持流速1 mL/min）。
(3) 重新溶解：洗脫液過0.45 μm濾膜，上機(jī)測試。

3、HPLC條件

設(shè)  備：Waters Alliance 2695
色譜柱 ：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm, 5μm)
檢測器 ：Waters 2487 紫外檢測器
流動(dòng)相 ：A：乙腈
B：磷酸鹽緩沖溶液（稱取磷酸二氫鉀      2.5g+
2.5g，加水溶解定容到1000mL）
洗脫方式：等度洗脫A:B=10:90
流速：1.0 mL/min
檢測波長：230 nm
進(jìn)樣體積:  20 μL

七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1、25 mg/kg飼料中苯甲酸的添加回收結(jié)果
表1 25 mg/kg飼料中苯甲酸的添加回收結(jié)果

2、添加水平為25 mg/kg飼料中苯甲酸檢測的液相色譜圖

圖1 添加水平為25 mg/kg飼料中苯甲酸檢測的液相色譜圖