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干貨分享:氨丁三醇(Tris)及鹽酸氨丁三醇(Tris-HCl)固體粉末配置緩沖液
閱讀:3186 發(fā)布時間:2023-10-26AVT團(tuán)隊(duì)向您推薦一種操作簡便且復(fù)現(xiàn)性較好的緩沖液配制方法:使用氨丁三醇(Tris)及鹽酸氨丁三醇(Tris-HCl)固體粉末進(jìn)行配制。
使用時,可根據(jù)目標(biāo)濃度及pH,計算并直接稱取兩種固體粉末混合,溶解定容,至于兩種固體粉末的用量如何確認(rèn),您可以參考以下實(shí)驗(yàn)步驟以及艾偉拓實(shí)驗(yàn)室實(shí)測值,通過一個簡單的預(yù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行確認(rèn):
1. 分別配制目標(biāo)濃度的Tris與Tris-HCl(這里以0.1mol/L為例)
2. 兩種溶液分別取不同體積混合成相同體積(這里以100mL為例)的緩沖液,測定溶液pH
待摸索出兩種溶液適宜比例后,根據(jù)計劃配置的緩沖液體積,倒算兩種固體粉末的用量。
基于該方法,我們復(fù)現(xiàn)了Moderna的xinguanmRNA疫苗中的Tris緩沖溶液,pH理論值為7~8,實(shí)測值為7.47(注:該實(shí)測值為溶液中only包含Tris/Tris-HCl,不含mRNA-LNP及其他輔料情況下的pH值)。
該方法的優(yōu)勢是操作簡便,只需稱取及溶解兩步,在外界溫度及溶液濃度相同的情況下,復(fù)現(xiàn)性較好,且無需使用濃鹽酸等嚴(yán)格受限的試劑。
使用該方法配置Tris/Tris-HCl緩沖液的注意事項(xiàng)如下:
①為避免Tris-HCl含量波動等因素造成配置的緩沖液pH不穩(wěn)定,建議采購質(zhì)量可靠的藥用級Tris及Tris-HCl產(chǎn)品。
②濃度及溫度對Tris緩沖液pH均有較大影響,建議做上述實(shí)驗(yàn)時,保持與實(shí)際使用場景相同的溫度與濃度,并在配置完成后最快時間進(jìn)行測量,避免二氧化碳的干擾。
③若變更使用濃度或環(huán)境溫度,需重新進(jìn)行上述實(shí)驗(yàn)。