AVT團(tuán)隊(duì)向您推薦一種操作簡便且復(fù)現(xiàn)性較好的緩沖液配制方法：使用氨丁三醇（Tris）及鹽酸氨丁三醇（Tris-HCl）固體粉末進(jìn)行配制。

 

使用時，可根據(jù)目標(biāo)濃度及pH，計算并直接稱取兩種固體粉末混合，溶解定容，至于兩種固體粉末的用量如何確認(rèn)，您可以參考以下實(shí)驗(yàn)步驟以及艾偉拓實(shí)驗(yàn)室實(shí)測值，通過一個簡單的預(yù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行確認(rèn)：

 

1. 分別配制目標(biāo)濃度的Tris與Tris-HCl（這里以0.1mol/L為例）

 

 

2. 兩種溶液分別取不同體積混合成相同體積（這里以100mL為例）的緩沖液，測定溶液pH

 

 

待摸索出兩種溶液適宜比例后，根據(jù)計劃配置的緩沖液體積，倒算兩種固體粉末的用量。

 

基于該方法，我們復(fù)現(xiàn)了Moderna的xinguanmRNA疫苗中的Tris緩沖溶液，pH理論值為7~8，實(shí)測值為7.47（注：該實(shí)測值為溶液中only包含Tris/Tris-HCl，不含mRNA-LNP及其他輔料情況下的pH值）。

該方法的優(yōu)勢是操作簡便，只需稱取及溶解兩步，在外界溫度及溶液濃度相同的情況下，復(fù)現(xiàn)性較好，且無需使用濃鹽酸等嚴(yán)格受限的試劑。

 

使用該方法配置Tris/Tris-HCl緩沖液的注意事項(xiàng)如下：

 

①為避免Tris-HCl含量波動等因素造成配置的緩沖液pH不穩(wěn)定，建議采購質(zhì)量可靠的藥用級Tris及Tris-HCl產(chǎn)品。

 

②濃度及溫度對Tris緩沖液pH均有較大影響，建議做上述實(shí)驗(yàn)時，保持與實(shí)際使用場景相同的溫度與濃度，并在配置完成后最快時間進(jìn)行測量，避免二氧化碳的干擾。

 

③若變更使用濃度或環(huán)境溫度，需重新進(jìn)行上述實(shí)驗(yàn)。