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技術(shù)文章

Tris-HCl的優(yōu)缺點(diǎn)對(duì)比

閱讀:3287          發(fā)布時(shí)間:2022-5-11

在生物制劑研發(fā)及生產(chǎn)過(guò)程中常會(huì)用到緩沖液,其作用是在有限的范圍內(nèi)調(diào)整溶液的pH值,使溶液的酸堿度符合制劑成分適宜的范圍。

常用的緩沖液有很多,如磷酸鹽緩沖液、Tris-HCl緩沖液、HEPES緩沖液、氨基酸緩沖液等。不同的緩沖液差別液很大,今天主要來(lái)對(duì)比兩種常用的緩沖液:Tris-HCl緩沖液與HEPES緩沖液各自的優(yōu)缺點(diǎn)。

一、Tris-HCl緩沖液與HEPES緩沖液優(yōu)缺點(diǎn)對(duì)比

 

 

1、Tris-HCl緩沖液

 

Tris緩沖液是在生化研究及制劑生產(chǎn)中使用較廣泛的一種緩沖劑,其本身為弱堿,常用有效pH在“中性”范圍,如Tris-HCl緩沖液:pH=7.5~8.5;Tris-磷酸鹽緩沖液:pH=5.0~9.0。

 

①Tris-HCl緩沖液優(yōu)點(diǎn)

堿性較強(qiáng),可以只用這一種緩沖液配置由酸到堿的范圍pH緩沖液;對(duì)生物化學(xué)過(guò)程干擾很小,不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。

 

②Tris-HCl緩沖液缺點(diǎn)

pH受濃度影響較大,稀釋10倍,pH變化大于0.1。溫度效應(yīng)大,如4℃時(shí)pH=8.4,37℃時(shí)pH=7.4。

 

 

2、HEPES緩沖液

 

HEPES是一種非離子兩性緩沖液,其在pH7.2~7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力,常用在體外診斷、DNA/RNA提取、脂質(zhì)體藥物等方面。

 

①HEPES緩沖液優(yōu)點(diǎn):

在開(kāi)放式培養(yǎng)或細(xì)胞觀察時(shí)能維持較恒定的pH值,并對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性作用。

 

②HEPES緩沖液缺點(diǎn):

在高濃度時(shí)對(duì)一些細(xì)胞可能有毒,與其他緩沖劑相比成本略高。

二、Tris-HCl緩沖液與HEPES緩沖液的應(yīng)用

 

 

1、Tris-HCl緩沖液的應(yīng)用

 

Tris常用于蛋白或者核酸的緩沖液,其在電泳緩沖液中與甘氨酸構(gòu)成緩沖體系,穩(wěn)定電泳過(guò)程中的pH,由于其具有弱堿性,水溶液的pH在10.5左右,可通過(guò)添加HCl或者NaOH制備不同pH的緩沖液,根據(jù)緩沖理論,Tris緩沖液的有效范圍通常是pH 7.0-9.2之間。此外,Tris還可以制備表面活性劑、硫化促進(jìn)劑和一些藥物(磷霉素等)的中間物,在化妝品、醫(yī)藥、涂料以及合成中均有應(yīng)用。應(yīng)用于體內(nèi)時(shí),Tris作為一種不含鈉的氨基緩沖堿,在體液中與H2CO3結(jié)合,生成碳酸氫鹽。因此它能緩沖酸,而且能降低CO2張力,有糾正急性呼吸性酸中毒和代謝性酸中毒雙重效果,其作用較碳酸氫鈉快而強(qiáng)。

 

①M(fèi)oderna核酸疫苗(mRNA-1273,pH7.0-8.0)

將SM-102、DSPC、膽固醇以及PEG脂質(zhì)與溶于pH 5.0乙酸鹽緩沖液中的mRNA以2.5:1(脂質(zhì):mRNA)的比例混合,再將混合物用Tris-HCl(pH=7.5)中和,加入蔗糖作為冷凍保護(hù)劑,最后將制備得到的溶液進(jìn)行無(wú)菌過(guò)濾,-70℃下冷凍保存準(zhǔn)備進(jìn)一步使用。

 

處方:

11.png

②恩利(注射用依那西普,Enbrel)

Enbrel是一個(gè)全人源的腫瘤壞死因子拮抗劑,是常用的藥物之一。

輔料:甘露醇,蔗糖,氨丁三醇(Tris)

 

2、HEPES緩沖液的應(yīng)用

 

HEPES緩沖液對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性作用,它是一種氫離子緩沖劑,能較長(zhǎng)時(shí)間控制恒定的pH范圍。使用時(shí)濃度為10-50mmol/L,一般培養(yǎng)液內(nèi)含20mmol/LHEPES即可達(dá)到緩沖能力。在體外診斷、DNA/RNA提取、脂質(zhì)體藥物等方面均有應(yīng)用。

 

①Onivyde® -伊立替康脂質(zhì)體

是一種拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑,與氟尿嘧啶和甲酰四氫葉酸組合,用于治療基于吉西他濱治療后疾病進(jìn)展的胰腺轉(zhuǎn)移性腺癌患者,為晚期大腸癌的一線用藥,也可用于術(shù)后的輔助化療;對(duì)肺癌、乳腺癌、胰腺癌等也有一定療效。

 

處方:

12.png

Tris-HCl緩沖液與HEPES緩沖液都是生物制劑中常用的緩沖液,如何選擇需要結(jié)合制劑本身的特性和處方優(yōu)化的需求綜合考量。

 

 

 

 

 

 

 

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