人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類ELISA測(cè)定試劑盒說明書

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中文名：人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類（MHCⅠ/HLAⅠ）ELISA試劑盒

別名：人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類（MHCⅠ/HLAⅠ）ELISA Kit

供貨商：上海樊克

產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T

檢測(cè)波長(zhǎng)：450 nm

96T使用方法：可用作標(biāo)本90個(gè)，標(biāo)準(zhǔn)曲線6個(gè)；

46T使用方法：可用作標(biāo)本46個(gè)，標(biāo)準(zhǔn)曲線6個(gè)；

主要成分：酶標(biāo)板，試劑，標(biāo)準(zhǔn)品等。

預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測(cè)定血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中的含量。

種屬：人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、豬犬、牛羊、雞鴨、植物ELISA試劑盒等

檢測(cè)目的：用于測(cè)定血清，血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本

ELISA常用的方法：雙抗體夾心法、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法以及BAS-ELISA等。
適用范圍：僅供科研，不能應(yīng)用于臨床

人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類（MHCⅠ/HLAⅠ）ELISA分析檢測(cè)試劑盒包含以下各組分：

（1）結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；

（2）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；

（3）酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）；

（4）酶的底物；

（5）陰性對(duì)照品和陽性對(duì)照品（定性測(cè)定中），ELISA試劑盒參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測(cè)定中）；

（6）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；

技術(shù)原理：

（1）抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。

（2）結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性。

（3）酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。

（4）受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。

（5）此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。

（6）加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。測(cè)定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重復(fù)性好。以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。

人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類（MHCⅠ/HLAⅠ）ELISA試劑盒雙抗體夾心法操作方法：

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡(jiǎn)稱洗滌，下同）。

2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔）。

3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。

操作注意事項(xiàng)

1.  試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。

2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

3.  不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

4.  使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5.  使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6.  洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

7.  底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。

8.  加入試劑的順序應(yīng)*，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。

人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類（MHCⅠ/HLAⅠ）ELISA定量檢測(cè)試劑盒性能：

1.準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。

2.靈敏度：zui低檢測(cè)濃度小于10pg/ml。

3.特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類（MHCⅠ/HLAⅠ）ELISA試劑盒部分相關(guān)產(chǎn)品：

人硫酸類肝素（HS）Elisa試劑盒

人硫酸角質(zhì)素（KS）Elisa試劑盒

人磷酸葡萄糖變位酶（PGM）Elisa試劑盒

人亮氨酰氨基肽酶（LAP）Elisa試劑盒

人抗髓磷脂抗體IgA（anti-myelinAb）Elisa試劑盒

人抗釀酒酵母抗體（ASCA）Elisa試劑盒

人遲現(xiàn)抗原（VLA）Elisa試劑盒

人吖啶橙（AO）Elisa試劑盒

人解脲脲原體抗體（UU-Ab）Elisa試劑盒

人甲胺喋呤（MTX）Elisa試劑盒