己烯雌酚類檢測試劑盒

己烯雌酚類檢測試劑盒

使用說明書

（酶聯(lián)免疫法）

 1 原理及用途

己烯雌酚類檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測組織樣本中的己烯雌酚（Diethylstilbestrol，DES），試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標板、酶標記物、抗體、標準品及其他配套試劑組成。檢測時，加入標準品或樣品溶液，樣本中的己烯雌酚和酶標板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗己烯雌酚抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含己烯雌酚含量成負相關(guān)，與標準曲線比較即可得出樣本中己烯雌酚的殘留量。

2 技術(shù)指標

2.1 靈敏度：0.05ppb(ng/ml) 

2.2 反應(yīng)模式：25℃，30min～30min～15min

2.3 檢測下限：

組織（蝦、魚） 0.2ppb

3 組成

酶標板 96孔

標準品：6瓶

高標準液：1瓶

酶標記物1瓶

抗體工作液1瓶

底物液A 1瓶

底物液B 1瓶

終止液1瓶

濃縮洗滌液1瓶

說明書 1份

4 需要的器材和試劑

4.1 儀器：酶標儀、打印機、均質(zhì)器 、氮氣吹干裝置、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）

4.2 微量移液器：單道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl

4.3 試劑：甲醇、乙腈、氫氧化鈉、丙酮、濃磷酸（含量85%）

5 酶聯(lián)免疫試驗步驟

    將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

5.1 編    號：將樣本和標準品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

5.2 加樣反應(yīng)：加標準品應(yīng)用液或樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加抗體工作液50µl/孔，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光反應(yīng)30分鐘。

5.3 洗    滌：將孔內(nèi)液體甩干，用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次，每次間隔30秒，zui后用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

5.4 加酶反應(yīng)：加酶標記物100µl/孔，25℃避光反應(yīng)30分鐘。

5.5 洗    滌：同上

5.6 顯    色：加底物液A 50µl/孔，再加底物液B 50µl/孔，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘（若藍色過淺，可適當延長反應(yīng)時間）。

5.7 終    止：加終止液50µl/孔，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。

5.8 測吸光值：用酶標儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長450/630nm）。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。

6 結(jié)果分析

6.1 百分吸光率的計算

    標準液或樣本的百分吸光率等于標準液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以*個標準液（0ppb）的吸光度值，再乘以*，即

A—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb標準溶液的平均吸光度值

6.2 標準曲線的繪制與計算

    以標準液百分吸光率為縱坐標，對應(yīng)的標準液濃度（ppb）的對數(shù)為橫坐標，繪制標準液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實際濃度。

    若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。（索?。?/span>

7 貯藏及保存期

儲藏條件：于2-8℃保存，避免冷凍。

保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見包裝盒。