PCR 擴(kuò)增差減雜交PCR擴(kuò)增

PCR 條件

反應(yīng)體系

時(shí)間

無(wú)需摸索條件

50ul

1-2 天

需要摸索條件

50ul

3-4 天

差減雜交PCR

差減雜交(Subtractive hybridization)的原理非常簡(jiǎn)單，首先將RNA反轉(zhuǎn)錄為雙鏈cDNA，稱為tester(含有目的基因)；對(duì)照RNA(不含目的基因)同樣處理，產(chǎn)生cDNA為driver，微量的tester和過(guò)量的driver在合適的條件下雜交，tester中和driver中相同的基因雜交子就被除去，在tester中*的基因被富集，通過(guò)PCR方法擴(kuò)增出來(lái)，得到差減庫(kù)，擴(kuò)增產(chǎn)物可以通過(guò)T載體直接克隆和測(cè)序分析。在探討兩個(gè)相關(guān)組織或兩個(gè)關(guān)聯(lián)過(guò)程中基因表達(dá)差異的情況，通過(guò)該方法可以獲得某些基因在某一樣品中表達(dá)，而在對(duì)應(yīng)的樣品中不表達(dá)或表達(dá)量很低。
該方法也可以用于基因組特異片段的篩選，差別在于前者用mRNA為實(shí)驗(yàn)材料，后者用基因組DNA或其它可比樣品的DNA為材料，兩者的后半部分實(shí)驗(yàn)內(nèi)容*相同，前者得到的主要是差異表達(dá)的基因，后者得到的主要是差異片段。

客戶需提供兩個(gè)樣品確實(shí)存在顯著差異的證據(jù)，并告知打算得到哪個(gè)樣品中被上調(diào)或下調(diào)的基因。如果同時(shí)想知道上調(diào)和下調(diào)的基因，則相當(dāng)于兩個(gè)服務(wù)，價(jià)格加倍。
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后我們會(huì)提供篩選到的含有差異基因的質(zhì)粒，用兩個(gè)樣品制備的cDNA制備的探針對(duì)篩選到的差異克隆進(jìn)行Southern鑒定的圖片一幅，以及簡(jiǎn)明實(shí)驗(yàn)步驟。