酶（熱啟動酶）

酶特征

•  克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大腸桿菌經(jīng)誘導表達后，經(jīng)過化學修飾，再經(jīng)三次過柱純化分離出來的重組蛋白。

•  在常溫下沒有聚合酶的活性，需經(jīng)過 95 ℃ 4mins 的高溫造成化學修飾基團的脫落，然后才有聚合的活性；這樣就避免在低溫階段的非特異性擴增；大大提高了 PCR 反應的靈敏度和特異性。隨著 PCR 擴增的進行，酶活性會被逐步釋放，這樣就有效提高擴增效率及產(chǎn)物量。

•  具有 5' 到 3 ‘合成 DNA 的能力；無 3 '到 5 ‘外切酶的活性。

•  具有 5 ' 到 3 ‘外切酶的活性， 可用于實時熒光 PCR 。

•  具有 3 ‘端加 A 的功能，產(chǎn)物經(jīng)純化后可直接用于 T － A 克隆。

•  無外源核酸酶和細菌 DNA 污染。

•  SDS － PAGE 檢測，純度＞ 95% 。

•  延伸溫度 72 ℃ ， Mg 2+ 濃度 1.5mM  dNTPS 濃度 0.2mM , 延伸速度為 2000base/min 。

酶單位定義

在 74℃ 條件下， 30 分鐘內(nèi)催化 10nmol dNTP 的摻入反應成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量為一個單位。反應條件為： 50mM Tris-HCl (pH8.3 ， 25℃ ), 50mM NaCl, 5mM MgCl2, 200mM dNTP( 含未標記和標記 [3H] dTTP ), 10mg 活化的小牛胸腺 DNA 和 0.1mg/ml BSA, 終反應體積為 50ml 。