熒光定量PCR

熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)從誕生到現(xiàn)在已經(jīng)有 8 年了，但是其應(yīng)用在近四年才迅猛增長(zhǎng)。在Medline 數(shù)據(jù)庫(kù)中，用“ Taqman" 或 "real time PCR"作為關(guān)鍵詞檢索，在1996年僅有19篇，在1997年僅有28篇，在98 、 99 、2000 年分別達(dá)到了52 、157 、409篇， 2003年已經(jīng)達(dá)到2984篇，相信在不久的將來(lái)會(huì)有更多的文章發(fā)表。針對(duì)實(shí)時(shí) PCR 這一熱點(diǎn)領(lǐng)域，

熒光定量PCR基本原理 
•  Taqman 技術(shù)：該技術(shù)以美國(guó) ABI 公司為代表。 PCR 擴(kuò)增時(shí)，在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針。該探針為一直線型的寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)熒光報(bào)告基團(tuán)和一個(gè)熒光淬滅基團(tuán)，探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收， PCR 儀檢測(cè)不到熒光信號(hào)； PCR 擴(kuò)增時(shí)（在延伸階段）， Taq 酶的 5' － 3' 外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條 DNA 鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與 PCR 產(chǎn)物形成*同步，這也是定量的基礎(chǔ)所在。

相關(guān)鏈接......
ABI公司
Taqman探針
MGB探針
Sybr green I染料
ROX染料
Taq酶（熒光定量PCR）
熱啟動(dòng)酶
熱啟動(dòng)熒光PCR定量核心試劑盒
一步法RT－PCR試劑盒
TrizolRNA提取試劑
UNG酶
標(biāo)準(zhǔn)品克隆
定點(diǎn)突變
亞克隆
dUTP

•  Beacon 技術(shù)：該技術(shù)以美國(guó)人 Tagyi 為代表。也是加入了熒光探針，但它是 環(huán)狀的寡核苷酸探針，分別由莖部和環(huán)部組成， 兩端分別標(biāo)記 熒光報(bào)告基團(tuán)和熒光猝滅基團(tuán)，在無(wú)靶序列的情況下，探針始終是環(huán)狀，報(bào)告基團(tuán)的熒光被猝滅基團(tuán)猝滅，使熒光檢測(cè)儀檢測(cè)不到熒光信號(hào)；而在有靶序列時(shí)，即在 PCR 的退火階段探針與靶序列結(jié)合，使熒光報(bào)告基團(tuán)和猝滅基團(tuán)分開，這樣熒光儀可以檢測(cè)到熒光，熒光信號(hào)的強(qiáng)弱代表了靶序列的多少。