篤瑪 犬白介素13(IL-13) ELISA 試劑盒  產(chǎn)品簡介

標(biāo)本要求
1. 血清：
室溫血液自然凝固10-20 分鐘后，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保
存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20 分鐘后，離心20
分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成應(yīng)再次離心。
3.尿液：
用無菌管收集。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀
形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
5.培養(yǎng)細(xì)胞:
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100 萬/ml 左右。
通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20 分鐘左
右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
6.組織標(biāo)本:
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化
后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻
漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢
測，其余冷凍備用。
7.標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進
行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
8.不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。




篤瑪 犬白介素13(IL-13) ELISA 試劑盒  產(chǎn)品簡介
ELISA 實驗步驟：
1.包被抗原：稀釋液pH 9.6 碳酸鹽緩沖液，多肽濃度2ug/ml，0.1ml/孔，4oC過夜，洗凈。
2.1%BSA (pH 9.6 碳酸鹽緩沖液) 封閉，0.1ml/孔，37oC1h，洗凈。
3.稀釋抗血清(可稀釋不同濃度) 0.1ml/孔，37oC 30分鐘，洗凈。
4.稀釋辣根過氧化物每標(biāo)記的二抗0.1ml/孔，37oC 40分鐘，洗凈。
5.顯色：TMB顯色
A液：四甲基聯(lián)苯胺10mg 溶于DMF1ml中，再用pH5.0檸檬酸緩沖液稀釋100倍.
B液：5ul雙氧水加蒸餾水12.5ml 。
終止液：2N硫酸
A液、B液各一滴，比光顯色10分鐘，終止液一滴。
6.450nm 波長測OD值



篤瑪 犬白介素13(IL-13) ELISA 試劑盒  產(chǎn)品簡介

操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
500ng/L 5號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
250ng/L 4號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
125ng/L 3號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
62.5ng/L 2號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
31.25ng/L 1號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液