篤瑪 雞蛋白聚糖4(PRG4) ELISA 試劑盒  產(chǎn)品說明

ELISA 實驗步驟：
1.包被抗原：稀釋液pH 9.6 碳酸鹽緩沖液，多肽濃度2ug/ml，0.1ml/孔，4oC過夜，洗凈。
2.1%BSA (pH 9.6 碳酸鹽緩沖液) 封閉，0.1ml/孔，37oC1h，洗凈。
3.稀釋抗血清(可稀釋不同濃度) 0.1ml/孔，37oC 30分鐘，洗凈。
4.稀釋辣根過氧化物每標記的二抗0.1ml/孔，37oC 40分鐘，洗凈。
5.顯色：TMB顯色
A液：四甲基聯(lián)苯胺10mg 溶于DMF1ml中，再用pH5.0檸檬酸緩沖液稀釋100倍.
B液：5ul雙氧水加蒸餾水12.5ml 。
終止液：2N硫酸
A液、B液各一滴，比光顯色10分鐘，終止液一滴。
6.450nm 波長測OD值操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
500ng/L 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
250ng/L 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
125ng/L 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
62.5ng/L 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
31.25ng/L 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

篤瑪 雞蛋白聚糖4(PRG4) ELISA 試劑盒  產(chǎn)品說明

標準樣品準備
1． 移取xx微升 標準液（Reagent F）到新的1.5毫升離心管
2． 加入xx微升 穩(wěn)定液（Reagent B），混勻
3． 放在冰槽里待測

測定準備

1． 準備好待測樣品，置于冰槽里
2． 設(shè)定好分光光度儀：波長670nm，并置零
篤瑪 雞蛋白聚糖4(PRG4) ELISA 試劑盒  產(chǎn)品說明
標本要求
1. 血清：
室溫血液自然凝固10-20 分鐘后，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保
存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：
應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20 分鐘后，離心20
分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成應(yīng)再次離心。
3.尿液：
用無菌管收集。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀
形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4.細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。
5.培養(yǎng)細胞:
檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100 萬/ml 左右。
通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20 分鐘左
右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
6.組織標本:
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融?br />后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻
漿器將標本勻漿化。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢
測，其余冷凍備用。
7.標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進
行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
8.不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。